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1、医院药剂科临床药学室操作规程一、MTT法测肿瘤药敏1.原理利用MTT化学试剂与活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶起反应，生成黑色结晶(甲簪)，甲簪的数量与活细胞数成正比，利用这一点可检测抗癌药物对癌细胞抑制作用的大小，将生成的甲簪用溶媒溶解后，用酶标仪读出其光密度(OD值)，即可算出抗癌药对癌细胞的抑制率，由此可判断该药是否敏感。2.操作步骤(1)将新鲜肿瘤标本剪去坏死组织及正常组织，在无菌条件下剪碎，过150目筛网，并用培养液冲洗2次。(2)若癌肿瘤标本较硬或较小，为获得足够数量的癌细胞，可用胰酶、胶原酶、DNA酶等混合酶进行消化，然后按步骤(1)操作。(3)吸取滤液至具塞离心管，离心10分钟(40
2、00r分钟)，注意平衡。(4)弃去上清液，将得到的贴壁物用培养液配制成一定浓度的癌细胞悬液。(5)在96孔培养板中设置空白组、对照组、用药组,其中空白组加培养液100微升，对照组加癌细胞悬液90微升，用药组加癌细胞悬液90微升和抗癌药工作液10微升。(6)将培养板放入二氧化碳培养箱，在37。5%C02的条件下培养4896小时。(7)4896小时后取出96孔培养板，每孔加20微升C02MTT试剂，继续放入培养箱中培养；48小时后每孔加入100微升10%十二烷基硫酸钠液，1218小时后用酶标仪在570毫微米处读出个孔光密度(OD值)，并计算抑制率。(8)废弃物应倒入废物锅内煮沸消毒后再进行处理。二
3、、丙戊酸、苯妥英钠、苯巴比妥、卡马西平、万古霉素血药浓度测定法免疫荧光偏振光分析法1 .原理免疫荧光偏振光分析法主要用于测定药物、激素等小分子物质。荧光标记328医院药事管理制度抗原由于分子量小,失去偏振性，所以其偏振光度小；而当抗原与抗体结合成大分子物质后，分子量增大，其偏振光度变大。标本中的抗原与一定量的标记抗原进行竞争反应，标本中的抗原越多，与抗体结合的标记抗原就越少，激发的荧光偏振光度就越少，从而可用于标本中抗原的定量。2 .操作步骤(1)用抗凝管采血12L,摇匀后吸取150微升至EPPendOrf管，另加溶解剂50微升及沉淀剂300微升，在漩涡混合器上混匀。(2)将样品放入离心机内，
4、离心8分钟(10800转/分钟)。(3)吸取离心后样品上清液200微升至对应数字键盘的稀释孔，锁紧。(4)将数字转盘放入TDX中，同时轻摇试剂盒，按顺序打开盖，放入试剂台。(5)按RUN键开始检测。(6)检测结束后，从样品中心取出样品和试剂盒，试剂盒储存于28。C的冰箱内备用。三、净化工作台操作规程1.净化工作台必须在检查情况良好的前提下方能使用，启动通风机前还必须清洁周围环境。2 .安放定位后必须将箱体下四只支撑脚调置平稳合理,减少噪声及震动现象。擦净净化工作台后，启动通风机，隔30分钟后方可使用。3 .操作区为层流区，因此出风面与加工件之间的台面上最好不要存放物件，以免妨碍洁净空气的正常流
5、动。4 .当工作完毕后方可停止通风机的使用，搬运工作台时必须将支撑脚向上移方可搬动。5 .正常使用情况下，建议每36个月进行一次检漏，气流速度检查。6 .操作人员应更换鞋、衣，以减少环境起尘，降低环境含尘浓度。7 .风量减少时应清洁更换中效和高效过滤器。四、90-2电动离心机操作规程1.将所要离心的样品称量平衡，放入离心机内对称位置,盖上顶盖。2.将离心速度调至所需位置，设置离心时间。3,离心机工作时，切勿打开顶盖，以防离心样品飞溅伤人。4 .待离心机停止工作时，打开顶盖，取出样品，盖上顶盖，并将离心速度调为零。五、318MC型酶标仪操作规程1.开机，仪器接通电源后，自动自检并显示：“M0DE
6、L318MC“READYXX：YYo5 .按Measmode,显示“model318MC“测量方式：IabsorbancemodEo6 .按enter,显示“Iabsorbancemode初始波长：FILTER405o7 .输入所需波长，如570。8 .按enter,显示“Iabsorbancemode处理方法:InoreagentblanKo9 .选择单孔空白,按2,显示IabsorbancemodesinglewellblanKo10 按enter,显示初始Iabsorbancemode“空白位置：BlankwellaIo11 输入所需空白位置,例如Hl,显示一ABSORB入CEMODEa
7、BLANKWELLHlo12 按enter,显示“Iabsorbancemode“Ibloneverypl13 .选每盘扣空白，按ENTER,显示“M0DEL318MC“READYXX：YYo14 .放入96孔培养板，按START,酶标仪即自动读数。六、TDX快速血药浓度检测仪操作规程1.开机前打开左侧盖，接缓冲液管，同时检查缓冲液量是否足够。注意注射器内不可有气泡，用蒸用水清洗后再用吸水纸轻轻将其吸干。2 .启动开关ON（在TDX左后位置）3 .屏幕显示日期、时间，分别按STORE储存。4 .TDX预热5分钟后，屏幕出现READY。5 .抽取患者血液l2mL,不同药物按不同方法处理备用。6
8、.从冰箱（28。C）内取出需检测的药品试剂盒，水平位轻轻来回摇动试剂盒（以免药物浓度不均），打开瓶盖,注意瓶盖与药瓶一致，不可乱盖，然后将试剂盒放入TDX机试剂盒槽内。7 .用标有数字之样品转盘按检测样品数由转盘120顺序加入等量的玻璃比色管和塑料的样品杯，并加入已处理好的样品，锁上转盘（手持转盘中央轴，按顺时针方向转动，听到咯哒一声），将转盘放入TDX机中。8 .视屏显示READY后方可进行。9 ,按RUN进行检测。10 .待屏幕示Done-Removerpak,同时伴有“xxx”声，即表示检测已完成。打开机盖，取出试剂盒后盖好，注意位置不能弄错，放入冰箱（28。C）内可继续使用。11.分析
9、结果，清洗探头。12 .出报告。13 .按PRlME键多次，将探针拉到中间位，用蒸储水洗探针后用清洗纸吸干净。14 .如停机多日不用，需将缓冲液更换成蒸储水。按PRlME键多次，清洗注射器。15 .将TDX开关按到OFF0七、GWJ-3型智能微粒检测仪的操作规程1.打开仪器的电源开关，仪器进入自检。自检合格后方可使用。2 .将检测杯反复冲洗干净，在灯光下观察，杯壁应光亮洁净无污渍。3,将搅拌转子从袋中取出，用纯净水冲洗干净。4 .用待测液体冲洗检测杯和搅拌转子。5 .将被检测液体倒入检测杯时，液体不宜过少，液面应高于取样头30毫升，使其位于搅拌器中心位置，盖好防尘盖。6 .调整搅拌器转速，以不
10、出现气泡、旋涡为宜。7 .按“确认”键，进行检测操作，检测开始后，仪器自动开启电磁阀使检测液体吸入计量管，并分道对微粒计数;当检测状态设置为“自动”时，仪器将连续进行数次测试;当检测状态设置为“手动”时，仪器单次检测完毕后停止,如需进行下一次检测，应重复本步骤。8 .检测结束后，可以进行数据查询或结果打印。9 .检测完毕后，必须使用纯净的无离子水清洗管路3次。八、BET-40型细菌内毒素检查仪操作规程1 .向水浴槽内注入蒸播水至水位线下沿。2 .接通电源，打开电源开关，同时仪器面板上的数字显示水浴槽内温度值。3 .按下温控键，加热指示灯亮，表示开始加热。4,按设置键上下调节时间，一般设置1小时
11、。5.试验准备、试验方法及结果判断按2000版药典“细菌内毒素检查法”的要求进行。6.当试管放到水浴槽内时，立即开始试验。按下测试键。7,满1小时，操作人员将双手食指放于试管架两端板的圆形凹陷处，向上后方轻轻提升试管架，缓缓倒转180度后观察并记录试验结果。九、XDS系列实验室倒置生物显微镜操作规程1.将亮度调节柄调至最小位置，接通开关，再将亮度调节手柄调至适中位置。2,将标本置于载物台上，使用低位同轴手轮可方便地操纵载物台移动，并可从刻尺和游标定出观察目标的位置。3 .载物台上可安装不同的物片、试管压片等，以适应不同的使用场合。4 .手握转换器外缘转动转换器，将低倍物镜置入光路,通过目镜观察，使用粗微调焦手轮使标本成像清晰。5,双手握目镜筒相对转动，可使双目瞳距与观察者瞳距一致。十、ZH-2型自动旋涡混合器操作规程1 .用潮湿棉布擦净工作台和仪器4个吸盘底脚的下面，将仪器放好并施加压力使仪器底脚吸盘与工作台吸紧。2 .用湿布擦试管下面，插入试管插盘合适的孔中，注意试管一定要垂直于插盘，否则工作时会有飞液现象。3 .接好电源线后，按需要选择定时器的时间。4 .顺时针转动调速旋钮，待仪器工作后，慢慢观察试样混合情况，适当回调以防试管中样品飞出。溶液以不超过试管高度的1/3为宜。
