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1、鲁东大学“国创计划”、“省创计划”结题申请书学院农学院项目编号S项目名称观赏用红肉苹果高效育苗技术集成应用项目级别省级研究期限项目起始时间：2021年4月计划完成时间：2023年4月实际完成时间：2022年4月姓名年级学号联系电话项目分工毕萌萌2019初代培养基的筛选郎思嘉2019初代培养基的筛选石一川2019生根培养基的筛选吴文博2019生根培养基的筛选岳红丽2019增殖培养基的筛选王秋琳2019增殖培养基的筛选赵馨殂2019增殖培养基的筛选井江卓2020驯化移栽孟凡雅2020驯化移栽指导教师姓名专业技术职务承担的工作梁美霞副教授对实验设计及开展等进行全程指导一、项目实施情况（请就研究目标、
2、研究过程、研究成果、研究心得作全面总结，3000字以内）：研究目标：本项目拟构建苹果树种苗木的高效繁育技术体系，提高苹果离体培养的繁殖系数，建立栽培示范基地，实现规模化生产，推动苹果的快速广泛应用。本项目完成后，可有效提高苹果苗木的供应量和质量，市场前景广阔，经济效益与社会效益显著，值得推广应用。研究过程：建立以组织培养为核心技术的良种快繁体系（1）外植体的获得：剪取红肉苹果优良株系植株上生长幼嫩的枝条，剪去叶片，流水冲洗30min,放在超净工作台上，用75%酒精处理30-40秒，无菌水冲洗2-3次，然后用10%次氯酸钠溶液浸泡7-8min,无菌水冲洗3-4次，切成ICrn左右带腋芽的茎段，接
3、种于不同的培养基上进行初代培养。（2）预防褐变，降低褐变率的关键技术：通过不同时期取材外植体、低温、抗氧化物质等多因子实验，降低褐变率，提高初代培养的成活率。成活率二成活外植体数量/未污染外植体的数量X100配（3）芽的诱导：带腋芽的茎段培养一段时间后，腋芽萌发，长成绿色的小苗，统计褐化率。褐化率二带腋芽褐化的外植体数/接种的未污染的外植体数XlO0玳（4）优化芽分化增殖培养基：将诱导的小芽转移到培养基上培养，逐步形成嫩绿的小苗，当苗高大于4cm时，以节为单位进行切分，接种于附加不同浓度生长素和细胞分裂素组合的培养基上，通过观察芽的生长状况和增殖系数，增殖系数二增殖后苗数（株）/增殖前苗数（株
4、），确定适宜芽增殖的培养基。（5）优化生根培养基：取大于3cm高度且生长健壮的小苗，接种在1/2MS附加不同种类和浓度的IAA和NAA培养基上，观察生根的数量和质量，统计生根数量和生根率，生根率（）:生根的幼苗数/接种的幼苗总数XlO0%,确定适宜生根的最佳培养基。（6）再生植株的驯化移栽关键技术：再生植株根系发达后，培养室内打开瓶盖,在组培室炼苗2-3天后，取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有灭菌的不同基质（蛭石，珍珠岩，沙子等）组合的营养钵中，控制环境温度、湿度和光照等外界条件，隔天喷施营养液，然后移栽到盛有田间土的较大营养钵中，统计移栽成活率，成活率二成活苗数/移栽苗总数Xl
5、o0即确定驯化移栽关键步骤技术和方法。研究成果：本项目通过红肉苹果优系通过组织培养法建立离体培养快繁体系，进行初代培养和继代培养选出最佳培养基。红肉苹果生长于较高浓度的NAA（0.2mgL）上增殖系数较高，再附以较低浓度的6-BA（1.0mgL）时，植株生长良好，无玻璃化现象。因此，最佳增殖培养基为MS+6-BA1.Omg/L+NAAO.2mgLo最佳生根培养基为NAA（0.5mgL）国内外研究现状和发展动态观赏果树是未来园林绿化的新宠，它在园林绿化上的应用越来越受到重视，不仅能够提供各种果品及多种副产品，而且为城市园林景观提供一道独特靓丽的风景线，有利于丰富城市绿化树种的多样性。目前，山东省
6、有以银杏、石榴、柿树、山杏等果树应用到城市绿化的先例，而以观赏类苹果作为城市绿化树种在我国尚属空白。苹果是山东省的世界名片，“中国苹果看山东，山东苹果看烟台”。苹果产业是我省经济发展的重要支柱产业。目前，我省苹果生产主要集中在鲜食苹果和加工苹果两方面，至于观赏类苹果的生产和研究均属于空白。山东省是旅游强省，沿海城市旅游是山东旅游的一大特色，可通过在沿海城市烟台等建立苹果树的绿化景点，为烟台苹果增添一道靓丽的风景加以推广示范，提高山东苹果的品牌影响力，丰富山东烟台苹果文化的内涵。项目组在前期的研究中选育了三个红肉苹果优良品系LH系，该品系红肉苹果树形紧凑、枝条叶片均为紫红色、花色鲜艳、花量大、坐
7、果率高、果实颜色鲜红色、座果时间长，抗病性、抗旱性均极强，完全适宜作为城市绿化树种。随着城市建设的迅速发展，特色绿化树种的需求空间极大。红肉苹果若想作为城市绿化树种推广使用，如何快速获得高质量的苗木，快速进行规模化生产，以满足园林绿化工程市场的大量需求是关键。传统苹果树种的繁殖方式主要有：嫁接繁殖、实生繁殖、压条或托插繁殖。栽培苹果品种主要采用嫁接繁殖方式保持其优良特性，苹果砧木主要采取实生繁殖、压条或托插繁殖。而对于红肉苹果绿化树种，上述几种繁殖方式周期长，繁殖系数低、苗木质量参差不齐，传统苗木的繁育方法无法满足绿化工程对大量优质苗木的供应需求。组织培养繁育苗木技术具有供应苗木周期短，苗木质
8、量具有高度的遗定性，能保持无性系母本的优良性状，有利于优良无性系苗木的规模化生产，在种质资源繁殖方面应用前景广泛。因此，本项目试图对红肉苹果建立其组织培养的离体快繁体系，提高优良株系的繁殖系数，缩短苗木的繁育生周期，提供生长势一致、生长强壮的无性系克隆苗，为其优良无性系工厂化育苗奠定基础；同时，以满足我国园林绿化工程项目红肉苹果苗木的大量需求，为园林绿化工程提供大量优质苗木，经济效益和社会效益显著，进一步推动红肉苹果的快速广泛应用，扩大山东苹果品牌的影响力。二、项目创新点与特色1、通过腋芽、茎尖离体培养的方法对红肉苹果进行规模化工厂育苗，加速红肉苹果树种的推广应用，构建以组织培养为核心技术的红
9、肉苹果绿化树种快繁体系。2.本项目实施后，缩短红肉苹果育苗周期，提高繁殖系数，形成苗木供应产业链，可为园林绿化工程项目提供大量优质红肉苹果苗木，市场前景广阔，在山东省和全国大规模推广示范应用以后，会产生显著的经济效益与社会效益。三、项目成果：项目申请书中的预期成果及成果提交形式：公开发表论文（1）篇、专利（）项、调查报告（）份软件、著作（）份、实物（）件、竞赛获奖（）次其它（）项目结题时取得的成果：公开发表论文（1）篇、专利（）项、调查报告（）份软件、著作（）份、实物（）件、竞赛获奖（）次其它（）项目主要研究成果情况序号成果名称（获奖名称及等级）成果形式作者（获奖者）出版社、发表刊物或颁奖单位
10、时间（刊期）1一种利用橡胶树幼嫩茎段离体培养试管苗的方法发明专利梁美霞毕萌萌鲁东大学2022.05.1723456四、研究体会和心得（500字以内）：本次创新实验是我第一次参与一个完整的创新实验过程，从最初的方案选取，到实验初步计划，到具体实验计划，再到实验的实施、结果分析，都需要我考虑周全，按部就班地进行。计划对前期初选出的柱型苹果、红肉苹果进行复选，筛选出抗病性、抗虫性强，且具观赏性的株系进一步扩繁苗木，将其中株型独特、花色奇异的优良株系进行试点绿化示范，打造极具苹果文化特色的烟台市旅游新景点。五、经费使用明细情况项目获批总经费：100oO无项目实际投入经费：ooo元实际使用资金：800。
11、ir结余资金：2000元项目经费开支情况名目用途金额备注论文版面费3000专利申请费2000调研、差旅费2000打印、复印费1000资料费1000试剂等耗材费元器件、软硬件测试、小型硬件购置费等；1000其它项目组承诺:我保证上述碓报甬容的嵬实器，经费使用规苑合理，项目鼠累无异度作假情况。负责人签名：毕萌萌项目组其他成员签名：岳红丽郎思嘉王秋琳2022年10月14日指导教师意见（包括项目的组织实施、研究成果、经费使用等情况）:本项目拟构建苹果树种苗木的高效繁育技术体系，提高苹果离体培养的繁殖系数，建立栽培示范基地，实现规模化生产，推动苹果的快速广泛应用。本项目完成后，可有效提高苹果苗木的供应量和质量，市场前景广阔，经济效益与社会效益显著，值得推广应用。指导教师签名：学院评审意见（项目的完成质量、学术水平以及推广应用价值）学院负责人签章：年月日学校评审意见学校负责人签章：年月日综课题口按计划完成，取得预期成果成果口很好口基本完成，但是与预期目标尚口较好合完成的创有差距口一般评情况新性口未达到预期目标口较差定评价等级优秀良好口合格不合格建议终止项目
