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1、2023-9-71胚胎移植技术胚胎移植技术2023-9-72一一、胚胎移植概述、胚胎移植概述1.胚胎移植的概念胚胎移植的概念2.胚胎移植技术的发展简史胚胎移植技术的发展简史3.胚胎移植在畜牧生产上的意义胚胎移植在畜牧生产上的意义2023-9-731.胚胎移植的概念胚胎移植的概念 胚胎移植（胚胎移植（embryo transfer,ET）也称受精也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发
2、育成为新个体，所以又的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。称之为人工授胎或借腹怀胎。提供胚胎的个体称为提供胚胎的个体称为-供体（供体（donor）接受胚胎的个体称为接受胚胎的个体称为-受体（受体（recipient）2023-9-742.胚胎移植技术的发展简史胚胎移植技术的发展简史 2.1初始阶段初始阶段 1890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔分别获得仔兔2只。只。2.2初级阶段初级阶段 1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵主要由英美科学家
3、在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左左右。右。2023-9-75 2.3发展阶段发展阶段 1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功。胚胎之后日、美采用非手术法移植成功。胚胎移植成功率达移植成功率达70-80%。2023-9-76 2.4实用化初始阶段实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英）。年牛冻胚移植成功（英）。2.5实用化研究阶段实用化研究阶段 1982-大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、大规模胚胎移植、
4、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展。克隆羊诞生。德广泛开展。克隆羊诞生。2023-9-773.胚胎移植在畜牧生产上的意义胚胎移植在畜牧生产上的意义1.提高优良母畜繁殖力提高优良母畜繁殖力,加快优良品种改良和动物育加快优良品种改良和动物育种步伐；种步伐；2.诱导双胎；诱导双胎；3.濒危动物的拯救与保护。将胚胎移入同种或近缘濒危动物的拯救与保护。将胚胎移入同种或近缘种生殖道内，以获得存活动物；种生殖道内，以获得存活动物；4.保存遗传资源、胚胎库；保存遗传资源、胚胎库；5.胚胎移植是胚胎工程操作的重要步骤。胚胎移植是胚胎工程操作的重要步
5、骤。2023-9-78二、胚胎移植的生理学基础与二、胚胎移植的生理学基础与基本原则基本原则 1.胚胎移植的生理学基础胚胎移植的生理学基础 2.胚胎移植的基本原则胚胎移植的基本原则2023-9-791.胚胎移植的生理学基础胚胎移植的生理学基础 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个；数个；每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育；每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育；早期胚胎处于游离状态；早期胚胎处于游离状态；胚胎发育不存在免疫问题；胚胎发育不存在免疫问题；胚
6、胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系；胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系；胚胎的遗传性不受受体的影响；胚胎的遗传性不受受体的影响；2023-9-7102.胚胎移植的基本原则胚胎移植的基本原则 种的一致性：供体和受体属于相同的种种的一致性：供体和受体属于相同的种 动物生理状态的一致性：黄体期动物生理状态的一致性：黄体期 解剖部位的一致性：子宫角或者输卵管解剖部位的一致性：子宫角或者输卵管2023-9-711胚胎移植原则图解胚胎移植原则图解2023-9-712三、胚胎移植的技术程序三、胚胎移植的技术程序1、供受体的选择与饲养管理、供受体的选择与饲养管理l供体供体2023-9-713三、
7、胚胎移植的技术程序三、胚胎移植的技术程序l受体受体2023-9-7142.供体超数排卵供体超数排卵 Superovulation or Multiple ovulationl 超排应用的主要激素超排应用的主要激素促性腺激素促性腺激素 FSH（中科院动物所（中科院动物所 宁波宁波 加拿大加拿大 日本）日本）PMSG（eCG）及）及APMSG（抗（抗PMSG）LH hCG GnRH（促排（促排3号）号）P4 PG（氯前列烯醇（氯前列烯醇 Cloprostenol，ICI-80996）三、胚胎移植的技术程序三、胚胎移植的技术程序2023-9-715 超排方法：在发情周期的一定时期，超排方法：在发情周
8、期的一定时期，用用PMSG或或FSH促进卵泡发育，于促进卵泡发育，于发情开始后发情开始后12-16h和和20-24h各配各配种（输精）一次，并于第一次配种种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射后静脉注射hCG或或LH，以便排出，以便排出多数卵子。多数卵子。2023-9-7162023-9-717各种动物的超排程序各种动物的超排程序 2023-9-718各种动物的超排程序各种动物的超排程序2023-9-719超排效果好的卵巢超排效果好的卵巢黄体黄体2023-9-720超排效果不好的超排效果不好的卵巢黄体卵巢黄体2023-9-7213.受体的同期发情受体的同期发情2023-9-722同期发情的方
9、法同期发情的方法2023-9-7234、供体配种、供体配种 人工授精人工授精 自然交配自然交配 配种次数应比平常多配种次数应比平常多1 2次次2023-9-7245、胚胎回收与鉴定、胚胎回收与鉴定 收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有关系。关系。（1 1）采卵时间：）采卵时间：一般将配种当日定为一般将配种当日定为0 0 天，由配种后第
10、二天，由配种后第二天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天采卵。采卵。（2 2）采卵方法：）采卵方法：有手术法和非手术法两种。在大家畜基本有手术法和非手术法两种。在大家畜基本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的一般收集卵子数只能相当于黄体数的40408080。2023-9-725 第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵第一种由宫管结合部冲
11、向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。小动物均可采用。第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。后常造成宫角尖端或输卵管粘连。2023-9-726 第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情
12、部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，天以后收集子宫内的卵，其收集数量比其收集数量比A,B法略少，易引起子宫粘法略少，易引起子宫粘连。连。冲卵液为杜氏冲卵液为杜氏PBS,用量用量:第一、第二两种第一、第二两种方法用方法用5-l0ml，第三种方法用，第三种方法用10-20ml。2023-9-727 SgieSgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。FolleyFolley和和StewartStewart又相继改进，设计出三通路（进气、进又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采
13、卵器（附图液、回液）导管采卵器（附图4 4），使用更加方便），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。有效，能够从同一供体反复收集卵子。冲卵液的用量一般为冲卵液的用量一般为500 ml500 ml，装入输液瓶内，每，装入输液瓶内，每次放出次放出30-60m130-60m1，反复冲洗子宫角，并回收到集卵，反复冲洗子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。宫角。2023-9-7282023-9-7292023-9-730胚胎的检查 将冲卵液回收之后，尽快置于放大将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-1510-15倍倍的实体显微
14、镜下，检查收集到的卵数，并的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大大40-20040-200倍的复式显微镜下，进行形态学倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图观察，选出适合于移植的正常卵（附图5 5）。）。形态不正常者（附图形态不正常者（附图6 6）及发育延迟）及发育延迟2 2天以天以上的卵，都不可用于移植。上的卵，都不可用于移植。2023-9-731显微镜下的胚胎显微镜下的胚胎2023-9-7322023-9-7332023-9-734胚胎鉴定及短期保存胚胎鉴定及短期保存 在在60 80倍立体显微镜
15、下。超排处理倍立体显微镜下。超排处理后，卵巢内的卵泡并非同时排卵，加之超排处理后，卵巢内的卵泡并非同时排卵，加之超排处理使生殖道内的内分泌环境改变，回收到的胚胎发使生殖道内的内分泌环境改变，回收到的胚胎发育程度发生变化。有的卵子可能未受精或受精后育程度发生变化。有的卵子可能未受精或受精后退化。这就需要对胚胎进行形态学鉴定，选出形退化。这就需要对胚胎进行形态学鉴定，选出形态比较正常的胚胎进行移植。胚胎分级态比较正常的胚胎进行移植。胚胎分级 A、B、C、D 优质（优质（Excellent）优良胚（优良胚（Good）普通胚普通胚（Fair）不良（不良（Poor）常温保存（常温保存（22 25）和）和
16、 低温保低温保存存2023-9-735显微镜下的胚胎显微镜下的胚胎2023-9-7366.给受体移植胚胎给受体移植胚胎移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。移植，简称移卵。l移植前受体准备移植前受体准备 受体移植前应证实卵巢上有发育良好受体移植前应证实卵巢上有发育良好的功能性黄体。在羊，有条件时可以进行腹腔镜检查，的功能性黄体。在羊，有条件时可以进行腹腔镜检查，确定黄体数量、质量和在哪一侧；受体在术前要饥饿确定黄体数量、质量和在哪一侧；受体在术前要饥饿12 24h 术部在术前术部在术前1d剃毛。牛在进行非手术移植前，剃毛。牛在进行非手术移植前，通过直肠检查确定是否有黄体和黄体的位置及大小。通过直肠检查确定是否有黄体和黄体的位置及大小。l手术法移植手术法移植 输卵管输卵管 子宫子宫l非手术法移植非手术法移植 牛现在一般采用经子宫颈移植，以前曾牛现在一般采用经子宫颈移植，以前曾采用绕过子宫颈移植法和采用绕过子宫颈移植法和Testart移植法，现已基本不移植法，现已基本不采用。羊需要腹腔镜和配套的操作器械采用。羊需要腹
