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1、结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果对比【摘要】目的：研究对比结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果对比。方法：纳入1246例，2021年1月-2021年12月期间，于我院进行结核菌检测的患者，采集患者的痰液样本，分别采用PCR结核分枝杆菌DNA检验与常规痰涂片法进行结核菌检验，对比检验结果，分析PCR结核分枝杆菌DNA检验与常规痰涂片用于结核病早期诊断灵敏度、特异度以及准确度。结果：PCR结核分枝杆菌DNA的阳性检出率15.08%与常规痰涂片的9.68%相比明显更高，PVo.05(2=19.168)；PCR用于早期结核诊断的灵敏度98.6
2、2%、特异度99.08%以及准确度99.OK与常规痰涂片的63.30%93.12席以及88.56比均明显更高，?0.05(2=88.229,2=57,381,2=133.728)。结论：对于结核患者而言，进行结核菌检验时，采用PCR结核分枝杆菌DNA检验灵敏度、特异度以及准确度与常规痰涂片检验相比均更高，可以更加简便、快速的检出患者的结核菌感染情况，在结核病的早期诊断中效能更优，可以为患者的临床治疗提供可靠依据，临床应用价值更高。关键词】结核菌检测;PCR;结核分枝杆菌DNA;常规痰涂片;微生物检验AbstractObjective：TocomparetheresultsofPCRMbacte
3、riumtuberculosisandconventionalsputumsmeartest.Methods:Atotalof1246patientstestedfortuberculosisinourhospitalbetweenJanuary2021andDecember2021wereincluded,Thesputumsamplesfrompatientswerecollected,testedbyPCRM.tuberculosisDNAtestandroutinesputumsmearmethod,Comparethetestresults,andanalyzethePCRMycob
4、acteriumtuberculosisDNAtestandconventionalsputumsmearforthesensitivity,specificityofearlyTBdiagnosisandaccuracy.Results:ThepositivedetectionrateofM.tuberculosisinPCRof15.08%wassignificantlyhigherthan9.68%ofconventionalsputumsmear,PVO.05(2=19.168).;ThePCRforearlyTBdiagnosiswas98.62%,99.08%andaccuracy
5、of99.01%comparedwith63.30%,93.12%and88.56%ofconventionalsputumsmear,PV0.05(2=88.229,2=57.381,Conclusion:Fortuberculosispatients,tuberculosistest,usingPCRmycobacteriumtuberculosisDNAtestsensitivity,specificityandaccuracyarehighercomparedwithconventionalsputumsmeartest,canbemoresimpleandrapiddetection
6、oftuberculosisinfection,betterefficacyintheearlydiagnosisoftuberculosis,canprovidereliablebasisforclinicaltreatment,clinicalapplicationvalueishigher.结核是临床上较常见的一种传染性疾病，对于患者的机体健康与生命安全均有着巨大的危害。目前，临床针对结核病患者的治疗，除了常规的规范化药物用药之外，还需要对其进行消毒隔离处理，以避免结核病菌的进一步传播，提升疾病康复率。研究显示，结核分枝杆菌(TB)是肺结核发病的主要致病菌，因此,临床诊断结核疾病时，多将
7、标本当中的结核分歧杆菌检出情况作为重要参考指标,而检测可疑性结核标本的方法较多，包括常规涂片、抗酸染色以及结核杆菌基因检测(PCR)等，这类方法均具有操作简单，方便快捷等优点，而且费用较低，临床普及度较广。而近年来，部分研究发现，PCR结核分枝杆菌DNA检验在结核病诊断效能更佳，可有效提升结核菌检出准确度，但由于相关研究较少，PCR是否能成为结核菌检测的首选方式仍需进一步探讨。基于此，本文纳入1246例，2021年1月-2021年12月期间，我院收入疑似为肺结核的患者，对比研究了结核菌检测中PCR结核分枝杆菌DNA检验结果与常规痰涂片检验结果，现报告如下:1.对象与方法1.1研究对象纳入124
8、6例，2021年1月-2021年12月期间，于我院进行结核菌检测的患者，男：819例，女607例；年龄：36-85岁，年龄均值(54.183.27)岁；本次研究于我院伦理委员会授权后开展，研究内容已详细告知患者及(家属)，且均表示自愿参与研究。纳入标准：所有患者均于入院将详细基本资料纳入研究，并开展体征检测;对研究涉及的相关检测操作有良好的耐受度；病例资料完整，且已录入数据库，可随时调取。排除标准：主观原因导致患者不能参与后续实验者；处疾病恢复期或3个月参与过其他实验者；患有精神疾病或认知方面有障碍者。1.2方法痰液样本采集：于清晨，采集患者第一口痰，即晨起之后，让患者马上以清水进行漱口，再将
9、第二、第三口痰液分别吐出，采用Who推荐的螺旋盖弹屏收集痰液本样后，以塑料袋进行密封保存，容器的表面必须对患者的性别、编号等进行明确标注。常规痰涂片检验：将患者咳出的脓性痰收集在干净的容器中，加盖密封，及时送检，检验时将痰液均匀涂抹在载玻片表面，烘干之后，采用贝索热染法染色液进行抗酸染色，之后将玻片放入到显微镜下对结核菌进行观察计数，所有检验均需严格依据结核病诊断实验室检验规程及试剂说明书要求执行。判定标准：若300个视野风，无未发现抗酸杆菌，即判定为阴性；100个视野内观察到3-9条抗酸杆菌数，即判断为阳性，可确诊为结核病。PCR结核分枝杆菌DNA检验：于痰液样本内加入4倍体积浓度为鬻的Na
10、OH,充分摇匀，于室温存放30min使其液化后，取0.5T.5ml置入离心管内，再加入0.5ml的NaOH,于室温下静置IOmin,以15000/min的转速进行离心处理，持续5min,去除上清液，加入Iml的无菌生理盐水进行沉淀，再行5min离心处理，之后再重复洗涤1次，沉淀之后，加入DNA提取液50Ul摇匀，进行IOmin沸水浴，再以100OOrAiin的速度进行离心处理，持续5min,取2ul上清液，采用环介导等温扩增技术(LAMP)进行扩增，扩增条件：V37C,反应时间为3min；93,反应时间为Imin；90,反应时间为5min；60,反应时间为40min；循环40个，反应终止，取R
11、eporter窗口下记录仪算出的Ct值作为检验结果，CT36即为阳性。1.3指标观察对比不同检验方法的结核菌阳性检出率；以培养、药敏、影像学以及分子生物学检查等综合检验结果为参照组，对比不同检验方法的检测灵敏度、特异度以及准确度。1.4统计学处理研究相关数据均由SPSS22.00统计学软件进行分析处理，各项统计学数据处理由于专业数据统计人员操作，以t、2值分别代且检验计量、计数数据，P0.05,即表示差异有统计学意义。1 .结果1.1 对比不同检验方法的结核菌检验结果检验结果显示，PCR结核分枝杆菌DNA检验的结核菌阳性检出率15.08%与常规痰涂片检验的9.68%相比明显更高，PVO.05。
12、见表1：表1对比PCR结核分枝杆菌DNA与常规痰涂片的结核菌检验结果(例/%)检测方法阴性/例阳性/例阳性检出率/%常规痰涂片(n=1426)12881389.68PCR(n=1426)121121515.08X2一一19.168P-0.052.2对比两种检验方法的结核菌检测效能检验结果显示，PCR结核分枝杆菌DNA检验的结核菌检测灵敏度98.62%、特异度99.08%以及准确度99.01%与常规痰涂片检验的63.30%、93.12%以及88.56%相比均明显更高，,V0.05。见表2：表2对比两种检验方法的结核菌检测效能（例/%）检测方法灵敏度/例特异度/例准确度/%常规痰涂片63.30(1
13、38/93.12(1125/188.56(1263/142(n=1426)218)208)6)98.62(215/99.08(1197/199.01(1412/142PCR(n=1426)218)208)6)X288.22957.381133.728P0.050.050.053.讨论结核病是一种典型的慢性传染性疾病，在临床中十分常见，发病的后可对患者的健康产生巨大威胁，临床研究显示，结核病的发生的与流行主要是结核分歧杆菌所致，可累有患者多个重要脏器，尤其以肺脏损伤最为常见，在结核病发病总率中，仅肺结核占比就高达80%-90%,而及时检出疾病不仅改善患者临床预后的关键，更是防止疾病流行传播的关键
14、。一直以为，临床用于结核菌检测的方法主要以常规痰涂片检验为主，此种检验培养方式有着较高的特异性，而且操作非常简单易行，检验费用方面也非常低廉。但是，痰涂片法在实际的检验处理中,极容易被外界相关因素所干扰，使得痰液标本受到污染，从而影响检验结果的准确性，导致假阳性结果的产生。而为了避免临床检验时的假阳性发生情况，临床必须对整个工作室进行全面隔离，且所有物品都必须使用一次性用具，从根本上杜绝污染源，以确保最终检测结果的准确度；此外，该种检测方法存在一定的人为性主观因素，容易影响患者的后续治疗。近几年，随着现代医疗技术水平的不断提升，PCR结核分枝杆菌DNA检验方式逐步在临床上得到应用，并且取得较好
15、的成效，这种更加先进的检验技术，不仅操作非常简便，而检测准确度非常高,可以更短的时间内确定患者是否受到结核菌感染及感染情况，给临床结核疾病的确诊与治疗带了重大影响。PCR结核分枝杆菌DNA检验作为一种全新型的结核检验方式，在近年来的诸多研究报道中均表现出了良好的敏感性与特异性，而且在检验操作方面列加简单、快速，已逐步成为临床检测结核菌最重要、最有效的方式之一。相较于常规的痰涂片检测法，PCR结核分枝杆菌DNA检验在诸多方面都表现出了明显的优势，且除了结核病诊断，在各类感染性疾病、肿瘤以及遗传性疾病也具有良好的效能，如PCR的检验操作更加简单，而且具有较好的可重复性等。另外，PCR结核分枝杆菌DNA检验全过程只需要5-6小时，大大减少了结核菌的检出时间，从而更早对患者的感染情况进行明确，并及时采取针对性的处理与治疗措施，以免疾病的进一步传播，整体检测效能更优，可以作为临床诊断结核类疾病的首选方式。本次研究结果也显示，PCR结核分枝杆菌DNA的阳性检出率15.08%与常规痰涂片的9.68席相比明显更高，P0,05(2=19.168)；PCR用于结核早期诊断灵敏度98.62*、特异度99.08%以及准确度99.0设与常规痰涂片的63.30尔93.12席以及88.56%相比均明显更高,PVo.05(2=88.229,2=57,381,2=133.7
