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1、阿托品与乙酰胆碱对豚鼠肠道的拮抗作用阿托品与乙酰胆碱对豚鼠肠道的拮抗作用与与pA2值的测定值的测定 v促胃肠动力药包括很多种类,这类药物有着不同受体类型和化学结构以及作用机制,对从食管到结肠的胃肠道的不同部位有着不同程度的促动力作用.这类药物对胃肠道作用机制的研究包括:胆碱能机制、肾上腺能机制、抗多巴胺和抗胆碱脂酶机制、神经体液机制等.v而胆碱能受体药物临床上广泛应用于慢性胃炎、反流性食管炎(GERD)、胃瘫、功能性消化不良(FD)等疾病的治疗.该类药物的作用机制还没有完全明确，研究其对胃肠动力的作用机制及临床应用有重大的临床意义。阿托品与乙酰胆碱的对肠道的药理学作用阿托品与乙酰胆碱的对肠道的
2、药理学作用阿托品阿托品v阿托品为阻断阿托品为阻断M胆碱受体胆碱受体的抗胆碱药，能解除平滑的抗胆碱药，能解除平滑肌的痉挛肌的痉挛(包括解除血管痉包括解除血管痉挛，改善微血管循环挛，改善微血管循环)。乙酰胆碱乙酰胆碱vAch可明显兴奋胃肠道，可明显兴奋胃肠道，使其收缩幅度、张力增加，使其收缩幅度、张力增加，胃、肠平滑肌蠕动增加，胃、肠平滑肌蠕动增加，并可促进胃、肠分泌，导并可促进胃、肠分泌，导致恶心、嗳气、呕吐、腹致恶心、嗳气、呕吐、腹痛及排便等症状痛及排便等症状 pA2pA2与与pD2pD2值的定义值的定义pA2vPA2是拮抗参数，当有是拮抗参数，当有一定浓度的拮抗药存在时，一定浓度的拮抗药存在
3、时，激动剂增加激动剂增加2倍时才能达倍时才能达到原来效应，此时拮抗药到原来效应，此时拮抗药的负对数即拮抗参数，的负对数即拮抗参数，pA2=-logI=-logKI。PA2的值越大说明拮抗剂的值越大说明拮抗剂的作用越强的作用越强 pD2vPD2：是激动剂与受体亲：是激动剂与受体亲和力的定量表示。和力的定量表示。PD2是是产生产生50最大效应最大效应(E=12Emax)的摩尔浓度的负对的摩尔浓度的负对数数(-logD)。PD2值越大，值越大，说明药物和受体的亲和力说明药物和受体的亲和力越大，药效越强。计算方越大，药效越强。计算方法与法与PA2相似相似 实验方法概述与目的实验方法概述与目的v本实验拟
4、用豚鼠的离体肠道并佐以乙酰胆碱与阿托品分别作为肠道激动剂与拮抗剂进行实验。观察其对肠道的竞争性拮抗作用，同时掌握pA2值的测定方法。实验器材实验器材离体器官浴池及恒温离体器官浴池及恒温装置装置 PowerLab系统系统 加液器加液器 培养皿培养皿 缝针缝针 线线 眼科镊子眼科镊子 剪刀剪刀 试药试药阿托品阿托品（mol/L）：）：3 10-7 乙酰胆碱乙酰胆碱（mol/L）：）：10-6、10-5、10-4、10-3、10-2 台氏液台氏液混合气体混合气体（95O25CO2）负荷）负荷500 mg实验器材与试剂实验器材与试剂 实验路线实验路线实验装置实验装置累积剂量效应曲线累积剂量效应曲线离体
5、肠离体肠制备制备猛击豚鼠头部至昏，猛击豚鼠头部至昏，立即剖开腹腔，自幽立即剖开腹腔，自幽门下门下5cm剪取空肠和剪取空肠和回肠上段，迅速置于回肠上段，迅速置于台氏液液中。小心修台氏液液中。小心修去肠系膜，用吸管吸去肠系膜，用吸管吸取台氏液液缓慢冲洗取台氏液液缓慢冲洗肠内容物；将空肠段肠内容物；将空肠段分割成分割成2 cm的小段备的小段备用。用。制成的标本一端固定制成的标本一端固定于通气钩上，另一端于通气钩上，另一端连接于肌力换能器并连接于肌力换能器并接入接入PowerLab系统系统的桥式放大器上，浴的桥式放大器上，浴池内放池内放20ml 台氏液液台氏液液，加，加500mg负荷，恒负荷，恒温温3
6、7 1 C，浴池内持，浴池内持续通入续通入95O2与与5CO2的混合气体。的混合气体。实验装置完毕以后，实验装置完毕以后，打开打开PowerLab系统系统，设置参数，设置参数。描记肠描记肠肌收缩曲线，待收缩肌收缩曲线，待收缩基线平稳后，按次序基线平稳后，按次序在浴池中加入预先配在浴池中加入预先配好的不同克分子浓度好的不同克分子浓度的乙酰胆碱。当反应的乙酰胆碱。当反应到一定高峰，再递增到一定高峰，再递增剂量，效应不再增加剂量，效应不再增加，此时的效应为最大，此时的效应为最大效应。效应。阿托品拮抗乙酰胆阿托品拮抗乙酰胆碱的剂量效应碱的剂量效应曲线的制作曲线的制作 放去浴池中的液体放去浴池中的液体，
7、用台氏液液冲洗，用台氏液液冲洗三次，以后每隔三次，以后每隔10min冲洗一次，冲洗一次，共冲洗三次，再加共冲洗三次，再加入台氏液液至入台氏液液至20ml。待收缩基。待收缩基线平稳后，加入阿线平稳后，加入阿托品托品107 mol/L 0.6ml（实际浓度（实际浓度310-9 mol/L），培育，培育15min。再按前法依次加入再按前法依次加入不同浓度的乙酰胆不同浓度的乙酰胆碱，便可得到有拮碱，便可得到有拮抗剂时乙酰胆碱的抗剂时乙酰胆碱的累积剂量效应曲线累积剂量效应曲线，此时拮抗剂（阿，此时拮抗剂（阿托品）摩尔浓度的托品）摩尔浓度的负对数即负对数即pAx。累积剂量法加药顺序累加次序药液浓度（mol
8、/L）药液的毫升数（ml）每L中累积剂量（mol）110-60.20.01210-60.40.03310-50.140.1410-50.40.3510-40.141610-40.43710-30.1410810-30.430910-20.141001010-20.4300附加药顺序表附加药顺序表为了正确求得为了正确求得各参数，必须各参数，必须将曲线直线化将曲线直线化。可按。可按D/R式使式使剂量效应曲线剂量效应曲线直线化。直线化。以肠肌收缩幅以肠肌收缩幅度作为纵坐标，度作为纵坐标，以药物对数浓以药物对数浓度为横坐标，度为横坐标，绘制量效曲线。绘制量效曲线。药物的最大效药物的最大效应即曲线的高应即曲线的高度。度。绘制累积绘制累积剂量效应剂量效应曲线曲线 直线回归直线回归计算参数计算参数 公式公式1maxmaxDEEKEDD式中：式中：D为药物剂量（浓度），为药物剂量（浓度），E为某一剂量的效应，为某一剂量的效应，KD为药物的解离为药物的解离常数，常数，Emax为药物的最大效应。以为药物的最大效应。以D/E为纵坐标，为纵坐标，D为横坐标进行为横坐标进行直线回归。根据公式直线回归。根据公式pA2=pAx+log(x-1)，式中，式中pAx为拮抗剂摩尔浓为拮抗剂摩尔浓度的负对数，度的负对数，x为用拮抗剂后与用拮抗剂前为用拮抗剂后与用拮抗剂前KD之比。之比。
