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1、n膜孔蛋白（porin）、离子通道蛋白以及Bcl-2 家族蛋白。n由膜孔蛋白构成的亲水通道，允许分子量为5KD以下的分子通过，1KD以下的分子可自由通过。n电子传递链(呼吸链)复合物IIV 和复合物V(ATP 合成酶)。n通透性很低，仅允许不带电荷的小分子物质通过，大分子和离子通过内膜时需要特殊的转运系统。n细胞色素Cn电压依赖性阴离子通道(VDAC)、ADP/ATP转换蛋白。n线粒体膜转运孔道(mitochondrial permeable transition pore，MPTP)存在于内外膜接触点。n凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor，AIF)和Procas
2、pase 2、3、9 及其他酶蛋白。n三羧酸循环：除糖酵解在细胞质中进行外，其他的生物氧化过程都在线粒体中进行。催化三羧酸循环，脂肪酸和丙酮酸氧化的酶类均位于基质中。n线粒体基因组：基质具有一套完整的转录和翻译体系。包括线粒体DNA（mtDNA），70S型核糖体，tRNAs、rRNA、DNA聚合酶等。n存储钙离子的致密颗粒。n哺乳动物的线粒体基因DNA没有内含子，几乎每一对核苷酸都参与一个基因的组成。n线粒体基因组能够单独进行复制、转录及合成蛋白质。n仅有少数线粒体蛋白质是由mtDNA编码，大多数线粒体蛋白质（90%）还是由核DNA编码。n环状，编码2 种rRNA、22 种tRNA和13 种参
3、与呼吸链形成的多肽。n通常裸露且不含内含子，既缺乏组蛋白保护和完善的自我修复系统，又靠近内膜呼吸链，极易受环境影响，突变频率比nDNA 高1020 倍。n如果线粒体DNA发生突变，不能产生足够ATP而导致细胞功能减退甚至死亡，临床上表现复杂多样，即线粒体病。n母系遗传。n细胞有氧呼吸和供能的场所，供应细胞生命活动95%的能量。n线粒体的主要功能是把氧化各种底物产生的自由能转化为可被细胞直接利用的形式ATP。n线粒体具有能量代谢与自由基代谢两条途径。燃料分燃料分解解（胞质（胞质中）中）乙酰乙酰CoA生成生成三羧酸循三羧酸循环环(线粒体基线粒体基质质)电子传递和电子传递和氧化磷酸化氧化磷酸化(内内
4、膜上膜上)生成生成ATP葡萄糖葡萄糖脂肪酸脂肪酸氨基酸氨基酸n线粒体是细胞中产生活性氧的一个重要部位，消耗氧用于合成ATP的同时不可避免地产生活性氧。n氧化应激作用下，膜转运孔道开放造成线粒体基质内的高渗透压，使线粒体内外H+梯度消失，呼吸链脱偶联，能量产生中断。n还会由于水和溶质的进入使基质肿胀并导致外膜破裂，通透性增高，释放出包括细胞色素C在内的各种活性蛋白。n过多自由基的产生可导致mtDNA的损伤，氧化损伤是mtDNA突变的主要原因。n线粒体本身也极易受氧化应激的攻击。n活性氧在启动和调节细胞凋亡的过程中扮演着重要的角色。n活性氧的积累可以导致：线粒体膨大，线粒体内膜非特异性孔道产生；细
5、胞色素C从内膜脱落并进入到胞质中；BAX表达，caspase活化等。这些都是启动细胞凋亡的因素。n从线粒体释放的细胞色素C与凋亡诱导因子、Procaspase 9结合在一起形成“凋亡体”（Apoptosome），导致Caspase 9和Caspase 3的激活。n内膜Bcl-2 家族蛋白调控紊乱。nCaspases激活、胞浆Ca+水平升高、产生神经酰胺，直接或间接地引发膜转运孔道持续开放。ROS膜转运孔道持续开放凋亡膜转运孔道持续开放凋亡n线粒体感受到钙微区，通过膜上协同转运体将钙摄入基质，然后以磷酸钙的形式储存在一些较大的致密颗粒中。n积累的Ca2+又可以通过钠钙交换系统和膜转运孔道再次释放
6、到胞质，从而调节胞浆中钙离子的动态平衡，影响细胞内许多相关的生理活动，如信号传导、能量代谢和细胞凋亡。nCa2+膜转运孔道膜转运孔道primary genetic defects）n线粒体病理性损伤nmtDNA突变(点突变、缺失、插入）导致线粒体功能缺陷。如线粒体肌病和脑肌病、线粒体眼病、老年性痴呆、帕金森病、糖尿病等。nmtDNA突变随着年龄累积。nmtDNA突变n呼吸链复合体IIV活性下降nATP合成减少n氧自由基产生增多n钙稳态失衡n脂质氧化增强n胰岛细胞线粒体参与胰岛素分泌、胰岛素抵抗的形成。n线粒体是高血糖时细胞ROS的重要来源。n线粒体氧自由基增多与糖尿病微血管并发症的发病机制相关
7、。n线粒体本身受氧化应激攻击，导致mtDNA 合成减少、发生突变。High glucosemitochondrial ROSkidney cells apoptosisnNitrotyrosine level(硝基酪氨酸,marker of oxidative stress)ncomplex I and complex VnATP/ADP rationUncoupling protein-2(UCP-2)expressionnmembrane potentialM.Anello et al.Functional and morphological alterations of mitochon
8、dria in pancreatic beta cells from type 2 diabetic patients.Diabetologia,(2005)48:2822897 cases,clinical diabetes was 5.60.6 years胰岛组织:n8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG，kidney and urine)nMitochondrial DNA DeletionnCOX I/COX IV(mt DNA/nDNA)Maiko Kakimoto,Toyoshi Inoguchi,Toshiyo Sonta.Accumulation of 8-Hydroxy-2-Deo
9、xyguanosine and Mitochondrial DNA Deletion in Kidney of Diabetic Rats.Diabetes 51:15881595,2002STZ rats,观察时间：4，8周肾组织:nNADH dehydrogenase(complex I)ncytochrome-c oxidase(complex IV)nCOX I n mtDNA levelsnmtDNA deletionDirk Lebrecht1,Bernhard Setzer1,Rolf Rohrbach,et al.Mitochondrial DNA and its respir
10、atory chain products are defective in doxorubicin nephrosis.Nephrol Dial Transplant,2004,19:329336doxorubicin nephrosis rats肾组织：Peraza MA,et al.Morphological and functional alterations in human proximal tubular cell line induced by low level inorganic arsenic:evidence for targeting of mitochondria a
11、nd initiated apoptosis.J Appl Toxicol.2006,26(4):356-67体外培养肾小管上皮细胞nenzyme activity assays(分光光度法)NADH(complex I),succinate dehydrogenase(complex II)细胞色素c还原酶(complex III)COX(complex IV)luciferin/luciferasen呼吸控制率(ATP 合成功能，氧电极法)n8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG，ELISA法)nROS(分光光度法)nglutathione and coenzyme Q(分光光度法,HPLC)n细胞色素C含量（western blot)ncaspase-9 and caspase-3(分光光度法)nBCL-2(免疫组化，western blot)nBAX(免疫组化，western blot)n膜转运通道开放程度(分光光度法)nCa+(分光光度法)n膜电位nlevels of mtDNA(PCR)nmtDNA deletion(PCR)nCOX I/COX IV(PCR，免疫组化，western blot)
