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1、中国大蜿野外种群及栖息地调查技术规程1范围本文件规定了XX省行政范围内中国大鲸野外种群调查及栖息地调查的基本术语以及关于调查内容、调查方法、调查成果、质量控制、后续样品处理等一般要求。本文件适用于对XX省行政范围内中国大鲸野外种群及栖息地的调查和快速评估。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB50707河道整治设计规范HJ710.8生物多样性观测技术导则淡水底栖大型无脊椎动物HJ1167全国生态状况调查评估技术规范-森林生态系统野外观测3术语和定义下列术语
2、和定义适用于本文件。3. 1样线法Linetransects指按照统计学要求布设调查样线，调查人员在调查样线上行进，观察并记录样线两侧中国大鲸的个体数的调查方法。3.2网笼陷阱法Traps是按照统计学要求布设网笼陷阱，根据网笼陷阱捕获的个体数对中国大鲸野外种群进行调查的方法。3.3环境DNA(e-DNA)调查法EnvironmentalDNAsuvey按照标准方法采集中国大鲸栖息地水样，经抽滤后分离e-DNA,采用中国大鲸特异性引物的PCR进行扩增，测序分析环境中中国大鲸的存在与否和数量的调查方法。3.4问卷调查法Questionnairesurvey是调查人员通过设置调查问卷，有计划地与当地
3、被访问者直接进行面对面的交流，获取相关信息的方法。3.5栖息地Habitat是指中国大鲸栖息的野外环境条件。主要由生物和非生物环境因子构成，涵盖了从水体到陆地的主要环境因子。4调查内容4.1 中国大鲸的种群数量（记录表格见附录A）4.2 中国大鲸的主要形态学性状（记录表格见附录B）：包括性别、全长、体重、尾长、头长、后肢长、尾宽、眼间距、前臂及手长、尾高、头宽、鼻间距、眼径、健康状况、是否存在外部伤口、是否存在细菌或病毒感染、是否有寄生虫等4.3 中国大鳏栖息地的e-DNA分析记录（记录表格见附录C）4.4 中国大鲸栖息地的主要环境因子（记录表格见附录D）：主要包括：经纬度、海拔、河岸土地利用
4、类型、气温、空气湿度、河床类型、河流底质、河宽、水深、水体流速、水体浊度、水温、总磷、总氮、氨氮、总硬度、溶解氧、总碱度、水体pH、电导率、植被类型与盖度、饵料生物。4.5 中国大鲸及其栖息地的受胁因素：包括道路建设、砂石采挖、涉水工程建设、农牧渔业活动、污染类型、污染强度、外来物种等5调查方法5.1 河道选择在开展调查的县市，通过与当地的政府部门（如渔政，林业站，保护区等）联系，也可采用访问调查或文献调查的方式，筛选2-3条有中国大鲸潜在分布的河流进行实地考察。选择河流中最合适的、生境最佳的调查地点。每条河流确定调查样线累计1公里（分别在河流的上、中、下游布设样线），调查需选择降雨少且水位低
5、的时期（建议调查时间为每年的4月-6月，每条河流连续调查三天）以及流速缓慢的河段，因为河流水量的降低将减少大鲸潜在的躲藏地点，增加发现的概率。野外调查需顺着下游到上游的方向进行，从而限制大貌在被发现前逃逸下游的可能性。在调查开始前，需在距起点05km处设置好安放器材及进行测量和棉签采样的工作点。在每一条样线的起点，填好野外实地调查记录表。5.2 野外种群调查对每条河流的样线法调查在天黑后进行。在河流的上、中、下游分别设置1条样线。大型河流（长度5km,河宽5m）的样线设置为长500-100Om,宽离岸2m,小型河流（长度5km,河宽5m）的样线设置为长200-500m,宽为整条河流的宽度。调查
6、开始后，3-4个调查者并排沿着河流由下游至上游方向，通过聚光照明涉水行进。涉水需选择水深Im且透明度高的河道，在离岸0.5m的河道内进行。调查过程中需佩戴手套，调查人员需准备好手抄网捕捉见到的大鲸个体。在较深且/或透明度较低的水体采用网笼陷阱法，该方法尤其适用于调查大鲸种群密度较低的地区。但需注意该方法在水温22。C时有效性高，水温过高可能会影响捕获率。网笼陷阱法布置的密度为3-5个网笼/样线，放网时间为每日黄昏，收网时间为次日早上6点。诱饵可选择鸡肠，大片的猪肝和/或沙丁鱼等，新鲜的诱饵可增加捕获率。网笼陷阱法尽量不要在中国大鲸的繁殖季节使用，因为雌性中国大貌可能会在陷阱中产卵，而捕获的雄性
7、中国大鲸可能失去护巢行为。采用环境DNA（e-DNA）调查法进行补充调查，在白天进行。在样线中水深1m,流速Im且有大石块分布的点取e-DNA水样，取样点设置为3个/样线。采用清洁剂清洗并用采样点河水润洗过的容器（4-5L塑料瓶）取水体表面以下2-5Cm的水样4L。注意采样人员需佩戴手套，且每次采样需更换手套。每个点需取两瓶水样（备份样品1个）。水样需用0.45Um的硝酸纤维滤纸（或玻璃纤维滤纸）在真空抽滤机进行过滤（玻璃设备需提前高温灭菌处理），滤膜保存在95%无水乙醇中用作后续分析（必要时可以更换滤膜，但所有滤膜均需保存在95%无水乙醇中）。采用问卷调查法进行补充调查,在每个村向至少10名
8、当地人了解长期以来大鲸种群数量的变动以及栖息地受胁情况（记录表格见附录E）。5.3 形态学性状测量、PlT标记及遗传背景样品取样对样线法和网笼陷阱法采集到的个体编号并进行形态学性状测量、PlT标记及遗传背景样品取样。测量的形态学性状包括1.全长；2.头宽；3.鼻间距；4.眼间距；5.眼径；6.尾宽；7.尾高；8.尾长；9.前肢长；10.后肢长；11.头长（图2）。同时记录个体的性别、健康状况、是否存在外部伤口、是否存在细菌或病毒感染、是否有寄生虫等。个体性别通过泄殖腔进行判断；健康状况、是否存在外部伤口、是否存在细菌或病毒感染、是否有寄生虫等通过对个体的外观观察进行判断。在进行形态学测量前，用
9、帆布或毛巾对大鲸进行简单的固定。一般情况下，全长和尾长采用软尺进行测量（不能采用钢卷尺以防对其造成伤害）。其他形态学性状采用带电子读数的游标卡尺进行测量，单位为mm,精确到0.1mm（如个体过大时可用软尺进行测量）。体重采用便携式钩秤进行测量，单位为g,精确到0.5g。需将个体放在防滑布中称重，以免对其造成伤害。测量人员均需佩戴一次性橡胶手套，并在每次测量前更换。PlT电子标签统一打在大貌左前肢腋下。遗传背景样品的取样优先采用无菌棉签采集口腔粘液或体表粘液的方式，其次可采用剪尾低损伤取样的方式。样品采集后用95%的乙醇保存并对应编号，带同实验室进行遗传背景分析.样品采集完成后，将大鲸原地放归。
10、5.4 栖息地调查栖息地调查和环境DNA（e-DNA）调查法取样均在白天进行。在调查河流的Ikm样线测量9个点的栖息地微生境环境因子（上、中、下游各3个点）。其中经纬度和海拔用GPS测定；河床类型参考GB50707进行分类；河宽和水深结合人为估算、卷尺和激光测量的方法；底质分类参照HJ710.8的规定：水体流速采用流速计进行测量；森林类型参照HJ1167进行划分；河岸土地利用类型分为四种（即河岸两侧无耕作土壤，营养丰富；河岸一侧无耕作土壤，另一侧为耕作土壤；河岸两侧耕作土壤；河岸两侧为耕作废弃的裸露的风化土壤层，营养物质很少）；饵料生物按其丰富程度分级为高、中、低三个等级；水质指标（水温、浊度
11、、电导率、pH、溶解氧、总硬度、总碱度、总氮、总磷、氨氮等）采用便携式水质仪直接测量或现场采样送检的方式进行测定（详见附录D）。根据调查地的真实情况，记录中国大鲸野外种群的受威胁程度。对调查点的道路建设、砂石采挖、涉水工程建设、农牧渔业活动、污染、外来物种等影响程度分级（强、中、弱、无；详见附录D）。6原始记录6.1 范围和载体原始记录应包括野外记录和实验室记录两部分。野外记录包括调查记录表、照片、视频、原始图件等。调查记录表需涵盖人工记录的数据和GPS、温湿度计、便携式水质分析仪等的自动记录数据。照片、视频应为数字载体的自动记录。6.2 保存原始记录需长期保存以备查阅。电子记录需备份保存。7
12、调查结果调查结果需提交相关表格、文字、图片和影像材料等。中国大鲸野外种群及栖息地调查的报告应对调查方法、种群数量（密度）、分布、栖息地状况、受威胁因素等进行详细叙述。同时还需要对调查到的每一尾中国大貌的形态学性状和遗传背景分别进行测量和分析。附录A（资料性附录）大鲸野外种群调查记录表A.1大鲸野外种群调查记录参见表A.1。表A.1大鲸野外种群调查记录表样线：地点：调查日期：年月日开始时间：时分结束时间：时分起点经纬度：海拔：终点经纬度：海拔：观测者：记录者：样线长：样线宽：天气：编号中文名调查方法个体数量备注成体亚成体幼体卵附录B(资料性附录)中国大鲸主要形态学性状记录表B. 1中国大貌主要形
13、态学性状记录参见表B.1。表B.1中国大鲸主要形态学性状记录表日期时间记录入样线样点编号经度纬度海拔幼体/亚成体/成体性别健康状况是否存在外部伤口是否存在细菌或病毒感染是否有寄生虫全长(cm)体重(g)头长(mm)眼间距(mm)头宽(mm)鼻间距(mm)尾长(mm)后肢全长(mm)尾宽(mm)前壁及手长(mm)尾高(mm)眼径(mm)附录C（资料性附录）e-DNA监测记录表C. 1e-DNA监测记录参见表C.1。C.1e-DNA监测记录表监测样地：样方编号：观测者：海拔：经度：纬度：风力：平静/微风/中/强天气：气温：湿度：日期：起始时间：结束时间：序号位点号是否监测到大鲸水样采集时间采集编号
14、生境DNA提取结果PCR分析检测结果结论注：DNA提取结果和PCR检测结果都以阴性和阳性表示附录D（资料性附录）中国大鲸野外栖息地调查记录表D.1中国大鲸野外栖息地调查记录表D.1。D.1中国大鲸野外栖息地调查记录表日期时间记录人样线样点经玮度河岸土地利用类型海拔（m）水温C气温C溶解氧砂石采挖PH涉水工程建设电导率农牧渔业活动浊度道路建设总硬度（mgL）污染类型总飘(mgL)污染强度总磷(mgI)饵料丰富度氨飙(mgL)外来物种总碱度（mgL）外来物种干扰强度水流速度（ms）河床类型水深Cm（离岸0.5m）底质河宽（m）植被类型湿度填表说明：河床类型参考GB50707进行分类。底质分类参照HJ710.8的规定。森林类型参照HJ1167进行划分。河岸土地利用类型（河岸两侧无耕作土壤，营养丰富；河岸一侧无耕作土壤，另一侧为耕作土壤
