血清肌酸激酶(CK) DGKC推荐方法测定 血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定方法.docx

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1、1.实验原理德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖糖微聘(HK)ADP+葡萄糖-6-磷酸(G6PQH)葡萄糖-6-磷酸+NADP6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+HNADPH在34Onm处有特异吸收,通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。2.标本:2.1病人准备:无特殊要求。2.2类型:血清,肝素或EDTA血浆。3.标本存放:稳定性:28保存稳定7天;1525保存稳定1天;-20C保存稳定4周(避光保存M3天内的活性损失:28e保存24小时或1822C保存1小时至少损失10%o4.标本运输:常温条件下保存运输。

2、5.标本拒收标准:细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒(试剂1664ml试剂26X16ml)6.1.1试剂组成:试剂1(Rl)+试剂2(R2):咪嗖缓冲液pH6.7100mmolL磷酸肌酸30mmolL葡萄糖20mnolLN-乙酰半胱氨酸(NAC)20mmolLEDTA-Na22mmolLADP2mmolLNADP2mmo1/L二腺昔-5-磷酸10mol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6P-DH)1500UL已糖激酶(HK)2500UL6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于28C,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示

3、:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂己变质,不能继续使用。6.1.5注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品:使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器:奥林巴斯AUlOOO生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数:参见AUIOoo生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:参见AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果

4、的判断与分析10.质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法:以TrUCalU复合校准品CK校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行CK活力检测,可以直接使用A/min均值乘以计算因子得到结果,但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算CK活力的计算因子见下表:AA/minX因子=CK活力U/L计算因子(37C):340nm41274207334nm365nm472912.参考值范围L(U/L)成

5、人:女性24-167男性24190参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义、%肌酸激酶(CK)主要由存在于肌肉中的同工酶(CK-M)和存在于脑中的同工酶(CK-B)组成。在血清中CK形式为CK-MM,CK-MB,CK-BB和巨醯等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的升高。CK和CK-MB一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围1200U/L14.2精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AUlOOO批内精密度小于3N,总精密度小于3M用于分析的质控血清和数据处理符合以

6、上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)批间精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)样品11593.182.00样品149.51.052.12样品22201.540.70样品2157L63LO4样品35083.690.73样品32282.311.0114.3方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对71个样品进行CK活力检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=0.98x+0.02(U/L);r=1.00014.5病人结果可报告范围:5-120OU/L。16.病危报警值的处理:无。17.方法局限性17.1本法对CK活力的线性

7、上限为1200U/L,当测定值超过上限时,应将样品用9gL氯化钠溶液作1+10稀释,重新测定,结果乘以17.2干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度684molL,血红蛋白2.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。18.补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1.SteinW.Creatinekinase(totalactivity),creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-Books

8、Verlagsgesellschaft;1998.p.71-80.2.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.PhiIadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617-72L3.RecommendationsoftheGermanSocietyforClinicalChemistry.Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivit

9、iesinbiologicalfluids:Standardmethodforthedeterminationofcreatinekinaseactivity.JClinChemClinBiochem1977;15:255-60.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.Introductionofnewstandardmethods1994forthedeterminationofcatalyticenzymeconcentrationsat37.DGKlinischeChemieMitteilungen1995;26:290-3.20.其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中

10、收集后按检验科废物处置管理规定执行血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定1.实验原理使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后,按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM(肌酸激酶的主要活性部分)和CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活力为余下的CK-B的活力,相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2,为CK-MB的活力。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖%1(hk)ADP+葡萄糖-6-磷酸葡葛糖-6-磷酸+NADP(g6p-d

11、h)6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H-2.标本:2.1病人准备:无特殊。2.2类型:血清,肝素或EDTA血浆。3.标本存放:稳定性:-20C保存稳定4周(避光保存*活性损失:28C保存24小时或1822保存1小时至少损失10%o4.标本运输:常温条件下保存运输。5.标本拒收标准:细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂利德曼CK测定试剂盒(X16ml)6.1.1试剂组成试剂I(R1)+试剂2(R2):咪哇缓冲液pH6.磷酸肌酸葡萄糖N-乙酰半胱氨酸(NAC)试剂1664ml试剂2671OOmniolZL30mmolL20mmolL20mnolL10mmolL2mmolL2mmolL2mmolL5

12、mmolL10 u mol/L1500UL2500ULM2000UL乙酸镁EDTA-Na2ADPNADPAMP二腺昔-5-磷酸6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6P-DH)己糖激酶(HK)抑制人CK-MM的人抗体6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于28C,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。6.1.5注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品:使用DiaSys公司提供的

13、TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器:奥林巴斯AinoOO生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数:参见AUloOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:参见AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控)做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法:使用A/min均值乘以计算因子得到CK-

14、MB活力。计算因子见下表:AA/minX因子=CK活力U/L计算因子(37):340nm8254334nm841412.参考值范围:0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义口编肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶(CK-M)和存在于脑中的同工酶(CK-B)组成。在血清中CK形式为CK-MM,CK-MB,CK-BB和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此,CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。14.操作性能14.1线性范围1OOOUL14.2精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3M用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(U/L)S(U/L).CV(%)批间精密度n=20X(U/L)S(U/L)CV(%)样品130.70.431.40样品131.50.270.85样品282.60.50OUq1样品293.30.49S53样品31941.000.52样品31871.060.5714.3方法学比较:本公司的试

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