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1、蛋白科学SOP考核卷大综合试题及答案1. A260A2802.0,说明质粒大概率被污染单项选择题*A、RNAB、蛋白质C、酒精D、盐2. A260/A280小于1.8,说明质粒大概率被污染单项选择题*A、RNAB、蛋白质C、酒精D、盐3. CIP过程中MabSeleCtSUreLX通常使用NaoH浓度是多少？单项选择题*A、0.1MB、0.5MC、IMD、2M4. CIP过程中PriSmA通常使用NaOH浓度是多少？单项选择题*A、OJMB、0.5M t确答案）C、IMD、2M5. SDS-PAGE样品处理时,非原样品如何处理？单项选择题*Ax 参力口 5xnon-reducing buffe
2、r参加 5xreducing bufferC、参加 5xreducing buffer, 100,加热 4TominD、参加 5xnon-reducing buffer, 100,力口热 4Iomin6. SDS-PAGE样品处理时,复原样品如何处理？单项选择题*八、参力口 5xnon-reducing bufferB、参加 5xreducing buffer*参加I 5xreducing buffer, 100,力口热IOminD、参加 5xnon-reducing buffer, 100,加热 4IOmin7 .保存填料使用的试剂为（）.单项选择题*A、OJMNaOHB、20%乙醇C、异丙
3、醇D、10%甘油8 .当质粒载体为pET28a,需要进行原核表达时,选用（）进行转化.单项选择题*A、DH5aB、TOPlOC、BL21DE3 小9 .电泳仪设置条件为电压多少？时间多久？单项选择题*A、160 V,20minB、100 V,20minC 140V,35min:确笞案D、160,25min10 .灭菌参数n 单项选择题*A、121 20minB、IOO 20minC、121 50minD、200 15min11 .灭菌锅没水时应加什么水O 单项选择题*人、自来水B、超纯水C无菌水D、重蒸水12 .为保证SDS-PAGE胶图条带清楚,样品上样量通常为（）配.单项选择题*A、1 A
4、确答案;B、2C、4D、513 .无Eer的上清上样量通常为O出.单项选择题*A、10B、20山确答案）C、40D、5014 .以下哪种情况可以翻开灭菌器拿出培养基1）单项选择题*A:设置的灭菌时间到了就可以拿出B：随口寸可以拿出C：温度70左右,压力表显示为O时 ：硝纭案15 .预制胶拆封后首先要做的步骤是O .单项选择题*A、拔梳子B、撕密封条C、装胶板D、加样16 .转化后培养时间应小于（）h 单项选择题*A、24B、20C、16D、817 .转化后涂布的平板放置方式：单项选择题*A、倒置（正确答案）B、盖子朝上C、都可以18 .His标签蛋白纯化时,洗脱液配方包括哪些？ *An 500
5、mM NaClB、50mM NaClC、20mM PB :确答案D、40100mM 咪晚19 . MOPS缓冲液适用于哪些情况？ *A、18OkDa以内蛋白B、分子量大的蛋白 正嘀答案）C、正C6工程正确答案;D、PP062 工程E、 IP15320 .电泳胶进行染色时,染色时长一般为多久？ *A、30min i案B、IOminC、染上色就可以（正确答案21 .配置ILLB培养基，以下哪些预混干粉的重量在允许范围内（）*A、25.2g 确答案B、24.5g正确答案C、26gD 25.8g22 .实验室常备了三种感受态细胞,分别是A:DH5a、B:ToPl0、CBL21DE3,当 构建质粒时,选
6、用（）.*A、DH5a 正确答B、TOPlO M确答C、BL21DE323 .使用超滤离心管时,说法正确的有*A、最大离心力为4000g li, A -B、可以把离心管装满C、离心温度一般设为4CD、使用时,可以不用看规格24 .参加LYS后如果还是有白色絮状物该怎么办填空题*（答案：再参加几毫升的LYS混合直至无白 色絮状物,然后NEU的体积也相对于 增加,保持LYS和NEU体积相等.）25 .某样品浓度为3.5mgml,理论分子量230kd需对其进行非复原处理.请写出计 算 步骤,并写明使用试剂种类与用量.填空题*26 .培养完成的细胞料液需要做哪些处理,请按顺序写填空题*（答案：a）测活
7、率,密度,titer； b）洗离心杯，离心过滤细胞液;C）贴好标签放入4 冰箱;d）置于4保存,暂存时间不超过3天）27 .请简述保菌流程填空题*（答案:超净台中取300RL60%甘油于冻存 管;取700RL新鲜菌液混匀;贴上标 签,登记入库,-20冻存）28 .请简述质粒转化的流程填空题*（答案：取5（）匹感受态细胞,超净台中参加IOng质粒；冰浴30min;热激90s, 立 即冰浴2min ；参加450IL无抗LB, 37C培 养45-60min ；1 OOOrpm离心3min,超净台中去除300RL上清液,混匀,取IOORL涂布于amp LB平板；37培养箱倒置培养 15h）29 .请写
8、出LB固体培养基配方填空题*（答案：25gLLBBroth+1.5%2%琼脂粉）30 .请写出LB液体培养基配方填空题*（答案：25gLLBBroth或5gL酵母浸粉、10gL胰蛋白陈、10gL氯化钠）31 .瞬转的核心材料有哪些？填空题*（答案：a）瞬转细胞;b） 15OmMNaCI, Feed, VPA,抗结团剂;C）瞬转试剂 （Fectoipro, PEI） ;d）瞬转质粒）32 .瞬转的目的是什么？填空题*泞案：看瞬转表达量,提升瞬转蛋白通量， 获得瞬转蛋白）33 .瞬转中（表达中）的细胞需要做哪些处理？填空题*1答案：a）测Gki,测Gin； b）测出er,测活率密 度;C）补料;d
9、）加抗结团齐IJ）34 .细菌接种后需要做哪些处理（用于大抽），请按顺序写填空题*（答案：a）假设没有库存甘油菌,应先保种;b）洗 离心杯;C）菌液离心去上清;d） 测菌的湿重）35 .现有10比质粒,浓度为20ng!iL,请给一个合理的质粒稀释方案以到达SOP中质粒转化的浓度要求.填空题*（答案：取51L质粒与5匹超纯水混匀）36 .质粒抽完后需要做哪些事情填空题* （答案：打标签，贴标签，登记入匹，W大抽 报告单）37 .His标签的蛋白洗脱后能用IMTriS调节pH.判断题*对错正确答案；38 . pl指的是等电点,调节PH时一定要调到7.判断题*对错正确答案；39 .293瞬转第二天细
10、胞补料添加 填空题*空1答案：5% Feed40 .293细胞比拟适宜的瞬转密度是（） X 106cellsmI 填空题* （答案：1.52）41 .293细胞传代的密度应在X 106cesml,活率以上填空题*空2答案：98%42 .AC是指填空题*空1答案：亲和色谱层析43 .CHO细胞比拟适宜的瞬转密度是（） X 106cellsml 填空题* 答案：2.53）44 .CHO细胞传代的密度应在X 106cellsml,活率 以上填空题*空1答案：23空2答案：98%45 .CHO细胞瞬转第二天补料添加填空题*空1答案：10% Feed46 .CV指的是什么？填空题* 答案：柱体积）47
11、.传代前先加培养基,培养基要 ,然后参加细胞填空题空1答案：先预热48 .传代中的细胞是否需要补料？ _ 填空题*空1答案：不需要49 .纯化需要当天配制适量的平衡液以及洗脱液，当使用2根5ml prisma预装柱进 行纯化时,至少需要配制的平衡液和洗脱液多少？填空题*1答案：I5OmI和 50ml）50 .大抽试剂使用前检查溶液是否有一,如果有,放在 C水浴锅里加 热填空题*空1答案：沉淀空2答案：3751 .富集细菌用于大抽或超声破碎的离心条件是 g, min 填空题*空1答案：5000空2答案：3052 .参加NEU后需离心g, min 填空题*空1答案：8228空2答案：1053 .检
12、测质粒浓度时,可以从结果中得出两个关于质粒质量的信息,分别是什么？ 填空题* :答案：浓度、纯度；54 .将收获液（细胞料液）离心以收集上清的离心条件是 rpm, min填空题*空1答案：1000空2答案：3055 .每瓶培养基中谷氨酰胺加ml,大约在mmol/L 填空题*空1答案：15空2答案：456 .灭菌时,摇瓶装液量不宜超过摇瓶体积的多少？填空题* 有案：50%）57 .培养基库存小于 一瓶时需申购,补料小于 瓶时需申购填空题*空1答案：10空2答案：258 .亲和纯化流程-10步填空题*（答案:CIP,冲洗,平衡,上样,平衡，洗脱,CIP,冲洗,平衡,保存.）59 .试剂 放在 水浴
13、锅里加热会更有利于质粒洗脱下来填空题空1答案：Elution洗脱液空2答案：6060 .试齐LYS参力后现象参加NEU后现象填空题*空1答案：溶液变蓝色空2答案：白色絮状物61 .瞬转过程中测糖结果需X,最终范围在mmol/L 填空题*空1答案：0.16空2答案：4662 .细胞复苏在水浴锅时长 ，复苏至少以上可以扩大培养填空题】*空1答案：小于2min空2答案：3代63 .细胞建库中将细胞沉降且对细胞损伤最小的离心条件是g, min 填空题*空2答案：1064 .细胞摇瓶的最正确使用容量是总体积的 _ 填空题*空1答案：三分之一65 .新开封的RES需参加,然后放在 保存填空题*空1答案：RNA酶空2答案：4。C冰箱66 .一般情况下,培养基的工作体积为摇瓶体积的多少？填空题（答案：三分之一）67 .一只细胞用一月后需重新复苏新的细胞填空题*空1答案：368 .异丙醇体积加填空题*空1答案：溶液体积的70%69 .质粒转化热激温度,时间分别是多少？填空题* （答案：42 , 90s70 .转化时,在感受态细胞中参加质粒后，需要冰浴多久？填空题* 答案：30min)
