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1、中国胃癌中国胃癌HER2HER2检测指南解读检测指南解读（20112011版）版）概述概述本指南推荐本指南推荐IHCIHC与与FISHFISH和（或）和（或）DSISHDSISH相结合的检测策略相结合的检测策略o胃癌有必要进行准确的胃癌有必要进行准确的HER2HER2检测检测oHER2HER2状态检测首先选用免疫组织化学法（状态检测首先选用免疫组织化学法（IHCIHC）oIHC 3+IHC 3+的病例视为的病例视为HER2HER2阳性阳性oIHC 2+IHC 2+的病例建议进一步行原位杂交（的病例建议进一步行原位杂交（ISHISH：FISHFISH和或和或DSISHDSISH）检测，检测，IH
2、C 2+/ISH+IHC 2+/ISH+的病例视为的病例视为HER2HER2阳性阳性oIHC 1+IHC 1+和和IHC 0 IHC 0 病例，病例，IHC 2+/ISH-IHC 2+/ISH-病例视为病例视为HER2HER2阴性阴性o胃癌胃癌HER2HER2检测应在有能力的实验室进行检测应在有能力的实验室进行o检测质量取决于标本的采集、处理过程、检测质量取决于标本的采集、处理过程、IHC/ISH IHC/ISH 检测方法和评检测方法和评判标准的执行判标准的执行问题一1.1.请问您所在的医院胃癌HER2检测是否属于常规检测项目？A.是B.否C.不清楚问题二请问您所在的医院，由谁决定是否做胃癌H
3、ER2免疫组化检测？A.病理科B.外科C.肿瘤内科D.消化内镜室问题三请您对多学科合作对胃癌HER2检测的重要性打分（0-5重要性逐渐递增），请按投票器选择A.0 B.1C.2D.3E.4F.5胃癌胃癌HER2检测检测切片切片脱水包埋固定固定 HER2 HER2检测的相关流程检测的相关流程切片检测判读标本标本收取收取问题四贵单位胃癌手术标本送到病理科处理的时间？贵单位胃癌手术标本送到病理科处理的时间？A 30分钟内B 1小时内C 2小时内D 2小时E 不清楚 问题五贵单位手术标本固定时间？贵单位手术标本固定时间？A.不固定直接取材B.固定时间在8小时内C.固定时间在12小时左右（过夜）D.固定
4、时间12-24小时E.不清楚标本类型o 原发病灶的原发病灶的手术切除标本手术切除标本o 原发病灶的原发病灶的胃镜活检标本胃镜活检标本l建议取建议取6-86-8块，以获得块，以获得足够的样本组织足够的样本组织，多点活检多点活检对对准确的检测有必要准确的检测有必要o 切除标本离体后切除标本离体后20203030分钟内分钟内进行标记、切开、固定等进行标记、切开、固定等初步处理后，及时送病理科初步处理后，及时送病理科o 活检标本的大小活检标本的大小2x2x2mm2x2x2mm3 3o 原发灶活检组织、手术切除组织皆有的病例，原发灶活检组织、手术切除组织皆有的病例，建议使用建议使用手术切除组织进行检测手
5、术切除组织进行检测标本采集问题六贵单位送检标本采用何种固定液？贵单位送检标本采用何种固定液？A.不用固定液，直接送病理科B.10%福尔马林固定液（蒸馏水配）C.10%福尔马林固定液（中性缓冲液配）D.10%甲醛固定液E.不清楚标本固定o 采用新鲜配制采用新鲜配制10%10%中性缓冲福尔马林中性缓冲福尔马林作为固定液作为固定液o 固定液的量应为组织的固定液的量应为组织的1010倍倍o 手术切除标本的固定时间为手术切除标本的固定时间为8 848h48h(至少至少1h/mm1h/mm组织组织)o 活检标本的固定时间活检标本的固定时间不超过不超过24h24h(至少至少1h/mm1h/mm组织组织)o
6、不宜使用其它固定液，非不宜使用其它固定液，非10%10%中性缓冲福尔马林制剂中性缓冲福尔马林制剂可能会妨碍可能会妨碍IHCIHC和和ISHISH检测的可靠性检测的可靠性o 不宜用微波快速固定组织不宜用微波快速固定组织规范的标本固定是规范的标本固定是HER2检测质量的保障；保存良好的组织检测质量的保障；保存良好的组织形态，防止细胞内蛋白和核酸的丢失形态，防止细胞内蛋白和核酸的丢失标本准备固定1小时固定52小时固定4小时固定2周固定时间影响固定时间影响HER2染色结果染色结果固定22小时图片由 of A Morey,St Vincents Hospital,NSW,Australia提供固定较差示
7、例：乳腺癌固定较差示例：乳腺癌HER2 IHC检测检测o 固定较差会导致染色结果的异质性o 胞质染色可能是由固定较差导致图片由 W Hanna提供固定较差示例：胃癌固定较差示例：胃癌HER2 IHC检测检测o 固定不完全会导致假阳性检查结果o 胞质染色可能由于使用了不恰当的固定方式图片由Targos Molecular Pathology.提供固定较差示例：固定较差示例：HER2 ISH检测检测图片由 Abbott/Vysis.提供p固定不完全-SISH，“空核”p固定不完全导致探针信号较弱或缺失p过度染色会导致持续性自发荧光 探针信号可能较弱或缺失HER2检测HER2HER2过表达的检测过表
8、达的检测HER2HER2扩增的检测扩增的检测n 免疫组织化学染色方法免疫组织化学染色方法（IHC）l 自动化自动化n 原位杂交方法原位杂交方法（ISH）l FISHl Dual SISH实验室总体要求o 应当在有条件的实验室进行，拥有试验所需的仪器应当在有条件的实验室进行，拥有试验所需的仪器和设备及空间条件和设备及空间条件o 实验室掌握包括标本的制备、抗体的选择、抗原修实验室掌握包括标本的制备、抗体的选择、抗原修复方法及其它相关技术；探针的选择、检测预处理复方法及其它相关技术；探针的选择、检测预处理方法及其它相关技术方法及其它相关技术o 实验室经过严格的内部和外部质量控制程序验证，实验室经过严
9、格的内部和外部质量控制程序验证，建立完善的建立完善的实验室标准操作流程（实验室标准操作流程（SOPSOP）o 实验室技术员具备相关资质及经过合格培训实验室技术员具备相关资质及经过合格培训HER2检测-IHCp IHCIHC方法方法l 试验方法根据实验室条件可以选择手工染试验方法根据实验室条件可以选择手工染 色、半自动染色和全自动免疫组化染色色、半自动染色和全自动免疫组化染色l 建议使用全自动染色方法建议使用全自动染色方法p 建议使用建议使用我国相关部门我国相关部门（SFDASFDA）批准的试剂盒）批准的试剂盒p 自行组配和分装的抗体必须经过严格的内部和外部质自行组配和分装的抗体必须经过严格的内
10、部和外部质 量控制程序验证，并与权威机构批准的检测试剂盒进量控制程序验证，并与权威机构批准的检测试剂盒进 行比对，以保证检测结果的可靠性行比对，以保证检测结果的可靠性IHCIHC抗体抗体结果判读和分析普通光学显微镜普通光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜p 病理医生需要经过培训p IHC评分标准和乳腺癌有所不同p 样本：活检组织和切除组织有所不同p 观察：高异质性需要全面观察所有肿瘤组织p 沟通：结果不确定时需要与肿瘤科医生沟通IHCIHC判读标准判读标准（参照ToGA经验，所有图片来自SCC）0 0 无 反 应 或 肿 瘤 细 胞 膜 染 色无 反 应 或 肿 瘤 细 胞 膜 染 色 1 0%1+
11、1+10%肿瘤细胞微弱或隐约膜染色，肿瘤细胞微弱或隐约膜染色，细胞膜仅部分区域着色细胞膜仅部分区域着色2+2+10%肿瘤细胞弱到中度的完全或肿瘤细胞弱到中度的完全或细胞基底部和两侧边膜染色细胞基底部和两侧边膜染色3+3+10%肿瘤细胞完全性或基底部和肿瘤细胞完全性或基底部和两侧边膜强染色（对两侧边膜强染色（对3+的病例同时的病例同时表明百分率，注明是否有异质性）表明百分率，注明是否有异质性）IHCIHC结果判读时应注意：细胞质着色应忽略不计，正常胃黏膜上皮细胞不应着色结果判读时应注意：细胞质着色应忽略不计，正常胃黏膜上皮细胞不应着色HER2检测-IHCo 原位杂交检测方法（原位杂交检测方法（I
12、SHISH）荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISH）双色银染原位杂交（双色银染原位杂交（Dual SISH，DSISH）o 探针探针建议使用我国相关部门（建议使用我国相关部门（SFDASFDA）批准的试剂盒）批准的试剂盒FISH，HER2红色信号增多，局部呈红色信号增多，局部呈簇状，簇状，CEP17信号信号1-2个，个，比值比值7.2，有扩增（，有扩增（100）FISH，HER2和和CEP17信号各信号各1-2个，比值个，比值1.65，无扩增（，无扩增（100）FISHFISH：严格按照试剂盒标准程序执行：严格按照试剂盒标准程序执行HER2检测-FISH图片来自图片来自SCCDSISH HER2
13、黑色信号扩增，呈簇状；黑色信号扩增，呈簇状；CEP17红色信号红色信号1-2个；比值个；比值15，有，有扩增扩增(100)DSISH HER2和和CEP17信号各信号各1-2个，个，比值比值0.8，无扩增，无扩增(100)DSISHDSISH：实验室应先进行严格的对比试验和程序优化：实验室应先进行严格的对比试验和程序优化 严格按照所用全自动染色仪器的优化程序和严格按照所用全自动染色仪器的优化程序和SOPSOP执行执行HER2检测-DSISH图片来自图片来自SCCSCC请问贵院是否有统一的HER2检测病理报告格式？A.是B.否问题七检测报告内容胃癌HER2 IHC/ISH检测报告临床信息：临床信
14、息：姓名 性别 年龄 门诊住院号 送检医师联系方式 检测日期 年 月 日标本信息：标本信息：病理号/蜡块号 标本类型：手术切除 活检肿瘤部位：胃食道交界处 胃底 胃体 胃窦 幽门管 转移灶标本固定液种类（10中性缓冲福尔马林）是否标本离体至固定时间(如有记录)分钟标本固定的时间(如有记录)分钟组织学类型/分级 Laurn分型 临床分期 T N M HER2 IHC 检测报告检测信息：检测信息：抗体信息(克隆号生产商)检测方法 手工/半自动 全自动 对照设置情况 3+0 样本量是否足够用于评估是否具有膜着色的肿瘤细胞的百分比%着色的异质性有无肿瘤细胞膜染色模式 完整 基底和侧膜（U-shaped
15、)两者皆有判读结果：判读结果：0 l+2+3+无法判读结论：结论：阳性；不确定；阴性；无法判读检测人员：技术员检测人员：技术员 病理医师病理医师 HER2 ISH 检测报告 检测信息：检测信息：探针信息(生产商/商品号)检测方法 对照设置情况 阳性对照 阴性对照 样本量是否足够用于评估是否IHC检测结果0 l+2+3+无法判读判读结果：判读结果：用于评估的肿瘤细胞数量 HER2信号总数CEPl7信号总数 HER2信号数平均值细胞核 CEPl7信号数平均值细胞核 17号染色体是否为多体是否结论：结论：阳性阳性(扩增扩增)阴性阴性(无扩增无扩增)无法判读无法判读 检测人员：检测人员：技术员技术员
16、病理医生病理医生 实验室质量控制（1）n HER2蛋白和基因扩增的检测均应在内、外部质量控制良好的病理实验室进行n 检测必须严格按照指南要求执行，以保证结果可靠n 不具备HER2检测条件的单位应按照指南要求，妥善处理和准备好标本，提供给有质量保证的病理实验室进行检测实验室质量控制（2）实验室内、外部质量控制和SOP的主要要求如下n 准备开展GC HER2检测的实验室应选择12家已较好开展该项检测的实验进行25100例标本的对比验证n 或通过参加有关外部质量控制活动来实现，外部质控阳性和阴性结果的一致性应达到90以上，每年应进行12次n 从事GC HER2检测的实验室技术人员和病理医师应进行必要的培训和资格考核实验室质量控制（3）n 实验室应建立完善的SOP，并做好每次检测情况的记录和存档工作n 任何改变操作程序和试剂的行为均应重新进行严格的验证n 内部质控应包括同一组织不同批次染色结果的重复性分析，每次染色阳性、阴性对照的设置，如有可能还应没置包括低表达低扩增对照n 检测相关的仪器和设备需定期维护、校验p 类似乳腺癌类似乳腺癌p 亮视野检测方法有优势亮视野检测方法有优势Her2检测流程
