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1、1猪圆环病毒病防控措施猪圆环病毒病防控措施2兽医科学研究的基本思路兽医科学研究的基本思路 基础研究：提供新理论和新概念，合成新材料：如病基础研究：提供新理论和新概念，合成新材料：如病原结构、分类、入侵细胞、与宿主互作，致病机理等原结构、分类、入侵细胞、与宿主互作，致病机理等 应用基础研究应用基础研究 （1 1）研制新型基因工程疫苗、诊断试剂盒、药物靶）研制新型基因工程疫苗、诊断试剂盒、药物靶标发现、抗微生物制剂筛选等标发现、抗微生物制剂筛选等 （2 2）以临床需要为导向，围绕复杂的临床现象，发）以临床需要为导向，围绕复杂的临床现象，发现原因，寻找解决方法。现原因，寻找解决方法。应用研究应用研究
2、 临床观察、收集数据、分析等临床观察、收集数据、分析等 制定新规程和标准等制定新规程和标准等3我国养猪生产指标的差异 2011年统计，我国母猪数量4700万头左右，母猪年提供出栏猪是14-15头左右。散养户较差的生产成绩降低了我国养猪业的整体效益。如果全群成活率达到90%以上，那么不同日龄阶段的成活率指标分别是：哺乳：96%，保育：97%，育肥：98%-99%。4国内外生产性能差距原因的分析国内外生产性能差距原因的分析 虽然母猪产仔数相当，但配种分娩率低虽然母猪产仔数相当，但配种分娩率低（85%85%）：繁殖障碍问题（传染病与饲料根）：繁殖障碍问题（传染病与饲料根源）。源）。产房仔猪：腹泻问题
3、产房仔猪：腹泻问题 保育猪与生长猪：残次率高保育猪与生长猪：残次率高 育肥猪：呼吸道问题（综合症）育肥猪：呼吸道问题（综合症）5保育阶段猪的主要问题：保育阶段猪的主要问题：断奶后发热（断奶后发热（40404141）消瘦消瘦 皮肤苍白皮肤苍白 关节肿大关节肿大 呼吸道症状呼吸道症状 残次率高，成活率低（残次率高，成活率低（50508585）6保育猪问题的根源保育猪问题的根源 疾病威胁疾病威胁（1）母源抗体消失）母源抗体消失（2）病原乘虚而入：猪繁殖与呼吸综合征病毒；）病原乘虚而入：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪猪2型圆环病毒；型圆环病毒；副猪嗜血杆菌；链球菌副猪嗜血杆菌；链球菌 管理因素：断奶和混群
4、应激；饲料的转换；密管理因素：断奶和混群应激；饲料的转换；密度增加度增加71 1、病原学、病原学 （病毒的特点）（病毒的特点）2 2、流行病学（如何传播）、流行病学（如何传播）3 3、致病机制（如何致病）、致病机制（如何致病）4 4、临床症状（有哪些表现）、临床症状（有哪些表现）5 5、诊断、诊断6.6.疫苗研究疫苗研究7 7、预防控制措施、预防控制措施8.8.需要解决的科学问题需要解决的科学问题猪圆环病毒相关疾病猪圆环病毒相关疾病Porcine circovirus-associated diseases相关临床表现：相关临床表现：仔猪断奶衰竭综合征仔猪断奶衰竭综合征皮炎肾病综合征皮炎肾病综
5、合征繁殖障碍繁殖障碍增生性肠炎增生性肠炎先天性震颤先天性震颤急性肺脏水肿急性肺脏水肿（Acute pulmonary edema）8我们在猪圆环病毒病研究的历史我们在猪圆环病毒病研究的历史 20002000年，陈院士获得第一个由国家资助猪圆环病毒年，陈院士获得第一个由国家资助猪圆环病毒病研究的课题病研究的课题-国家自然科学基金课题（国家自然科学基金课题（3017070130170701），），开展感染性克隆和病毒基因功能、伪狂犬病开展感染性克隆和病毒基因功能、伪狂犬病-2-2型圆型圆环病毒基因工程疫苗研究。环病毒基因工程疫苗研究。20072007年：分离出猪年：分离出猪2 2型圆环病毒型圆环病
6、毒WHWH株和其他毒株。株和其他毒株。20072007年年-：国家生猪产业技术体系项目资助。：国家生猪产业技术体系项目资助。20122012年年7 7月，获得新兽药注册证书月，获得新兽药注册证书-现在现在-将来：临床应用技术的集成。将来：临床应用技术的集成。91 1、动物和人类的圆环病毒、动物和人类的圆环病毒 植物：椰树叶腐烂病毒、三叶草侏儒病毒和香蕉簇植物：椰树叶腐烂病毒、三叶草侏儒病毒和香蕉簇顶病毒。顶病毒。禽类：鹦鹉喙羽病毒、鸽圆环病毒、金丝雀圆环病禽类：鹦鹉喙羽病毒、鸽圆环病毒、金丝雀圆环病毒、鹅圆环病毒。鸡传染性贫血病毒毒、鹅圆环病毒。鸡传染性贫血病毒()()；人类：美国在人轮状病毒
7、疫苗中发现类圆环病毒；人类：美国在人轮状病毒疫苗中发现类圆环病毒；输血传播病毒（输血传播病毒（TTVTTV），），TTV-like minivirusTTV-like minivirus 猪圆环病毒起源：由植物矮缩病毒（猪圆环病毒起源：由植物矮缩病毒（plant plant nanovirus)nanovirus)和脊椎动物杯状病毒重组产生（和脊椎动物杯状病毒重组产生（Gibbs and Gibbs and Weiller,1999Weiller,1999）10猪圆环病毒分类猪圆环病毒分类 分为分为PCV1PCV1和和PCV2PCV2型等。基因组型等。基因组1.7kb1.7kb，是目，是目前发
8、现最小的脊椎动物前发现最小的脊椎动物DNADNA病毒。病毒。PCV1PCV1目前为止尚未证明致病性。目前为止尚未证明致病性。PCV2PCV2存在于多个组织，有致病性。存在于多个组织，有致病性。19651965年：血清中发现年：血清中发现PCV2PCV2病毒；病毒；19911991年第年第一个圆环病毒病案例报道。一个圆环病毒病案例报道。19981998年分离出病年分离出病毒。毒。11PCV2 特点特点 无囊膜，单股负链环状无囊膜，单股负链环状DNADNA，基因组大小为，基因组大小为1767(PCV2b)-1768bp(PCV2a)1767(PCV2b)-1768bp(PCV2a)能在能在PKPK
9、1515细胞生长，但无肉眼可见的病变；细胞生长，但无肉眼可见的病变；其生长依赖细胞周期其生长依赖细胞周期S S期表达的细胞蛋白。期表达的细胞蛋白。用用D D氨基葡萄糖处理感染细胞，可促进病氨基葡萄糖处理感染细胞，可促进病毒的增殖。毒的增殖。12毒株名称毒株名称GenBank登录登录号号基因组大小基因组大小Anhui01HQ113120 1767bpAnhui02HQ113121 1767bpSCcdHM1023501767bpShenzhen02HQ1131171767bpShenzhen03HQ113118.11767bpShenzhen05HQ113119 1767bp猪猪2型圆环病毒基因
10、组虽然小，但危害大型圆环病毒基因组虽然小，但危害大13猪猪2 2型圆环病毒主要基因的功能型圆环病毒主要基因的功能 ORF1ORF1：编码聚合酶，与病毒复制有关：编码聚合酶，与病毒复制有关 ORF2ORF2：免疫原性基因和毒力相关基因：免疫原性基因和毒力相关基因 很多基因工程疫苗或亚单位疫苗使用的靶基很多基因工程疫苗或亚单位疫苗使用的靶基因。如因。如表达表达ORF2ORF2的重组伪狂犬病毒、重组沙门的重组伪狂犬病毒、重组沙门氏菌、重组波氏杆菌等。氏菌、重组波氏杆菌等。ORF3ORF3：引起细胞凋亡：引起细胞凋亡 ORF4ORF4：负调控病毒的生长：负调控病毒的生长 其它其它6 6个个ORFORF
11、的功能未知的功能未知14PCV2 毒株之间ORF2的比较B.R.Trible,R.R.R.Rowland/Virus Research 164(2012)68 77受体结受体结合区合区诱饵诱饵表位表位区区抗体结合区抗体结合区ORF2ORF2与病毒毒力的关系与病毒毒力的关系 两个氨基酸突变：P110A（传代30代，脯氨酸P变为丙氨酸）和R191S（传代120代，精氨酸变为丝氨酸）：增殖滴度增加，毒力增强；基因组中1331-1339bp（gctgtggcc，位于ORF2基因（10331734bp）中）序列差异（Krakowka S,，Virus.Res.2012，164:9099）:蛋白构象改变-
12、疏水变为亲水；1516PCV2感染降低活疫苗免疫效果感染降低活疫苗免疫效果1.1.Oppressing T,McKeown NE,Harmon KL,Meng XJ,Halbur PG.Oppressing T,McKeown NE,Harmon KL,Meng XJ,Halbur PG.Clin Vaccine Immunol.2006 Aug;13(8):923-9.Clin Vaccine Immunol.2006 Aug;13(8):923-9.PCV 2 PCV 2感染降低了蓝耳病活病毒疫苗的功效感染降低了蓝耳病活病毒疫苗的功效 另一方面，蓝耳病毒感染后，促进圆环病毒在体内的增殖另一
13、方面，蓝耳病毒感染后，促进圆环病毒在体内的增殖和分布（和分布（G.M Allan et al.,2000G.M Allan et al.,2000）2.Huang YL,Pang VF,Lin CM,Tsai YC,Chia MY,Deng MC,2.Huang YL,Pang VF,Lin CM,Tsai YC,Chia MY,Deng MC,Chang CY,Jeng CR.Vet Res.2011 Dec 1;42(1):115.Chang CY,Jeng CR.Vet Res.2011 Dec 1;42(1):115.PCV 2 PCV 2感染降低了减毒猪瘟疫苗的功效感染降低了减毒猪瘟
14、疫苗的功效 3.3.影响伪狂犬病活疫苗的再次免疫应答。影响伪狂犬病活疫苗的再次免疫应答。Kekarainen(2008)：元凶是元凶是PCV2 ORF1中的中的CpG基序基序17猪猪2型圆环病毒研究的瓶颈问题型圆环病毒研究的瓶颈问题-病毒分离的影响因素病毒分离的影响因素 PCV1PCV1污染，干扰污染，干扰PCV2PCV2的分离的分离 细胞无病变，很难确定是否感染；细胞无病变，很难确定是否感染；不同毒株对细胞适应性有差异不同毒株对细胞适应性有差异18猪圆环病毒猪圆环病毒2型型WH株的分离株的分离uPCRPCR阳性病料接种细胞，在第阳性病料接种细胞，在第5 5、1010、1515、20 20 代
15、细胞培养物中，通过间接免疫荧光试代细胞培养物中，通过间接免疫荧光试验验(IFA)(IFA)、普通、普通PCRPCR、荧光定量、荧光定量PCRPCR鉴定均鉴定均为为PCV2PCV2阳性阳性,于第于第2020代后毒价显著升高。代后毒价显著升高。19PCV2-WHPCV2-WH株分离鉴定株分离鉴定注：2、3、4为阳性结果；PCR鉴定结果IFA检测猪圆环病毒2型在PK-15中的分布 IFA鉴定结果荧光定量荧光定量PCRPCR鉴定，分离毒株鉴定，分离毒株(WH(WH株株)拷贝数为拷贝数为5.845.8410108 8/0.1g/0.1g 20PCV2-WHPCV2-WH株基因组序列株基因组序列uGenB
16、ank GenBank 登录号为登录号为FJ598044 FJ598044 uPCV2-WHPCV2-WH株基因组为株基因组为PCV2bPCV2b此外，也分离了此外，也分离了9 9株圆环病毒株圆环病毒21我国流行毒株为我国流行毒株为PCV2bu235 ORF2235 ORF2PCRPCR为阳性的病料中，为阳性的病料中，9 9株为株为PCV2 2aPCV2 2a基因型基因型 133133份为份为PCV2 2bPCV2 2b基因型基因型 9898份：为非份：为非2a2a和和2b2b，推测为，推测为2c2c（丹麦存在）（丹麦存在）uPCV2bPCV2b毒力高于毒力高于PCV2aPCV2au基因型呈地方分布特征基因型呈地方分布特征u同一个猪场有同一个猪场有PCV2aPCV2a和和2b2b同时存在同时存在采用：采用：ORF2 ORF2 和全基因组测序；区分不同和全基因组测序；区分不同基因型的基因型的PCRPCR等方法等方法22分离毒株接种猪的皮炎病例-分离出新的基因型毒株，PCV2d;23新的病毒基因型不断出现 台湾：台湾：2001-20032001-2003：PCV2a:22.9%PCV2a:
