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1、保健食品功能检验与评价方法（2023年版）耐缺氧1.1 试验项目1.1.1 体重1.1.2 常压耐缺氧实验1.1.3 亚硝酸钠中毒存活实验1.1.4 急性脑缺血性缺氧实验1.2 试验原则所列指标均为必做项目。13结果判定常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验三项实验中任二项实验结果阳性，可判定该受试样品具有耐缺氧的作用。耐缺氧检验方法1常压耐缺氧实验1.3 原理缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。1.4 材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）1.5 实验动物
2、推荐用近交系成年小鼠，单一性别，1822g,每组10-15只。1.6 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天,1.7 实验步骤各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的25OmL磨口瓶内（每Kl只），用凡士林圭施口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。1.8 统计方法及结果判定缺氧时间为计量数据,采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性
3、检验,方差齐，计算尸值，产值R）g结论：各组均数间差异无显著性；尸值P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。1.9 注意事项：1.9.1 每个磨口瓶内最好只放1只小鼠，以防互相干扰影响耐缺氧能力的测定。1.9.2 磨口瓶一定要密闭封严，以防漏气，否则会影响实验结果。1.9.3 磨口瓶必须等容量（误差lmL）,实验前先用水加以校正。1.9.
4、4 每批实验动物的体重应尽量保持一致。2亚硝酸钠中毒存活实验2.1 原理亚硝酸钠使正常二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能力，造成组织缺氧死亡。2.2 材料亚硝酸钠、秒表、ImL注射器2.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，18-20g,每组10-15只。2.4 剂量分组同42.5 实验步骤各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物按200-240mgkgBW剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1mLIog）立即计时，记录动物存活时间。2.6 统计方法及结果判定存活时间为Il量数据,采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行
5、方差齐性检验,方差齐，计算F值，产值尸0。5,结论：各组均数间差异无显著性；尸值2Fo.os,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。3急性脑缺血性缺氧实验3.1 原理动物断头后，由于脑供血终止，在短时间内脑中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持短暂时间，显示出有规律地张口喘气，以喘气时间为指标，可观察受试样品对脑缺血性缺氧的保护作用，凡
6、能使脑耗氧降低的受试样品，均能延长动物喘气时间。3.2 材料剪刀、秒表3.3 实验动物同I33.4 剂量分组同1.43.5 实验步骤各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。3.6 统计方法及结果判定喘气停止时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算尸值，产值同05,结论：各组均数间差异无显著性；F值2尸03,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。受试样品组与对照组比较，喘气时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。3.7 结果判定常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验三项实验中任二项实验结果阳性，可判定该受试样品具有耐缺氧的作用。3.8 注意事项3.8.1 断头用的大剪刀必须锋利，断头时操作要敏捷，捉拿小鼠不宜反复多次或捉拿时间过长。断头部位在小鼠耳根后部，切勿损伤延脑，否则断头后小鼠不显现喘气活动。
