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1、AO工艺处理石化废水的方法简介石化废水是石化工业在生产各种石油产品和有机化工材料过程中产生的废水.石化废水污染物种类多、成分复杂、水质水量波动大.废水中含有石油类、苯和苯的衍生物等多种毒性有机物，属于难降解的工业废水1.单一的处理工艺很难达到要求，常采用物化法预处理，厌氧/好氧生化法二级处理，有些石化企业为达到更高的排放标准或实现回用还设有深度处理工艺2,3.其主体工艺为以活性污泥法、缺氧/好氧(A/0)、生物流化床等为代表的二级生化处理工艺。A/0工艺具有较高的有机物降解和脱氮能力，并且基建和运行费用低，近年来在国内外发展迅速,溶解氧是0段需要控制的重要指标.曝气费用一般占污水运行费用的60
2、%80%,溶解氧过高会造成能量的浪费，而且影响总氮的去除.较低的溶解氧会抑制好氧菌的活性，影响有机物的降解和硝化作用，研究采用A2/0工艺处理生活污水，当0段溶解氧(DO)浓度从4.Omg1.-I降到1.On1.g1.-I时，COD的去除率一直保持在较高的水平，但系统硝化效果降低.研究表明较低的DO水平(1.52.4g1.T)有利于A/0生物膜反应器的快速启动，而且抗冲击负荷能力强.目前关于DO影响的研究大多针对生活污水，对处理实际石化废水的研究十分有限；并且缺乏DO对反应器微生物群落结构和代谢机制的影响研究.传统的分子生物学方法操作繁琐复杂，得到的信息量有限.R。Cher454测序9是一种基
3、于焦磷酸测序原理的高通量基因组测序技术，具有测序速度快、读长长、通量高、准确度高和一致性好等优点.它不仅可以获得样品中的微生物群落组成，并将其含量进行数字化，而且可进行种群多样性和丰度分析.本文以实际石化废水为处理对象，研究DO浓度对A/0反应器降解有机物和脱氮除磷效果的影响；并解析不同DO浓度下微生物的群落特征，以期为A/0工艺运行调控提供技术基础.1材料与方法1. 1实验装置实验装置如图1所示.废水经蠕动泵进入A/0反应器，出水经沉淀池沉降后从顶部溢流堰排出，沉淀池底部的污泥经蠕动泵回流至缺氧A段.反应器由有机玻璃制成，分为平行运行的A、B两组,每组由一个A段和两个好氧段01、02组成，总
4、体积为451.,A段、01段和02段的比例为1 ：2：沉淀池体积为281.反应器在A段设有机械搅拌，0段采用底部砂棒曝气.A组反应器0段的DO控制在23mg1.-B组反应器控制在56mg1.-反应器温度为2326t.1.2实验用水和启动、运行方案实验装置建在我国北方某石化综合污水处理厂内.该污水厂的进水由工业废水和生活污水两部分构成，比例约为3：1.工业废水来源于该公司下属的炼油厂、化肥厂、电石厂、树脂厂等所有化工厂处理后的出水.实验用水取自该污水厂的水解酸化池出水，水质指标如表1所示,进水COD波动较大，总氮（TN）主要以氨氮为主，总磷（TP）含量比较低.接种污泥取自该污水厂的曝气池.反应器
5、自2013年4月24日启动，闷曝48h后开始连续进水.水力停留时间（HRT）为30h,回流比为100%.经过两周左右的驯化，出水水质稳定，COD去除率达到70%以上，反应器启动成功,反应器稳定运行分两个阶段：自2013月5月20日至2013年9月40,HRT为30h；自2013年9月5日至2013年11月6日，HRT为20h.污泥龄（SRT）为50d.定期（每隔23d）取样测定反应器进水、出水的COD和氨氮浓度.不定期检测进、出水B0D5、TN.TP浓度和反应器各段COD和氮化合物的浓度分布.所有水样均采用0.45m滤膜过滤后再进行分析,反应器运行稳定后，取两组0段污泥样品进行微生物种群结构解
6、析.对反应器进、出水进行溶解性微生物产物（SMP）、蛋白质、多糖和腐殖酸含量以及3D-EEM荧光光谱检测分析其水质特性的变化规律.1.3分析方法BOD5、COD、氨氮、硝氮、亚硝氮和总磷测定均参照国标方法测定11.总有机碳（TOC）和TN使用总有机碳分析仪（ToC-VCPH/CPN,岛津）测定.多糖测定采用苯酚硫酸法，蛋白采用考马斯亮蓝法.污泥浓度（M1.SS）采用重量法测定.DO和水温采用便携式溶解氧测定仪（YS1.-55OA）.采用3D-EEM荧光光度计（HitaChiF-7000）分析出水溶解性有机物质的组成12,激发波长（EX）为200400nm,发射波长（En1.）为240500nm
7、,狭缝宽度5nm,扫描速度1200nmmin-光电倍增管PMT电压700V.微生物种群分析采用454高通量测序法，具体实验方法如下.1. 3.IDNA提取与纯化生物膜样品的DNA采用E.Z.N.A.土壤DNA提取试剂盒（OMEGA公司）进行提取，实验按照生产厂商提供的方法进行.2. 3.2PCR扩增DNA样品采用16SrRNA通用引物（27F和533R）对细菌的V1V3区域进行扩增,前向引物（5-Gccttgccagcccgctcagagagtttgatcctggctcag-S,）包含454B衔接子序列和细菌通用引物27F序歹!|.反向引物（5-Gcctccctcgcgccatcagnnnnn
8、nnnnnttaccgcggctgctggcac-3）包含454A衔接子序列，随机组合的10个碱基标记每一种PCR产物和细菌通用引物533R序列.PCR反应于201.体系中进行，包含0.4UmO1.1.T正向和反向引物，IU1.模板DNA,200nmo1.1.-IdNTP和IXFastPfuBuffen以不含DNA的PCR水来稀释.PCR反应程序设定为：94。C预变性2min,95变性30s,55退火30s,72C延伸30s,共25个循环，最终72。C延伸5min.扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增产物以AxyPrepTM凝胶回收试剂盒回收（AXYGEN公司）.1.3.3扩增产物检测、焦磷
9、酸测序扩增产物DNA浓度用Quant-iTPicoGreendsDNA试剂盒测定（InVitrogen公司）,DNA样品以301.TE缓冲液稀释，在微细胞比色皿加入等量2XPicoGreen工作溶液，总反应体积60u1.以465485nm为激发波长,515575nm为发射波长，采用TUrnerBioSyStemSTBS-380荧光光度计测定其荧光强度.浓度定量测定后，纯化后的DNA,等摩尔比例加入到试管中.焦磷酸测序采用454GSF1.XTitanium测序方法（罗氏），由上海美吉生物医药科技有限公司进行.在0.03水平进行OTU聚类和物种分类分析.以MOTHUR软件以及序列聚类软件Usear
10、ch4.0.38进行序列比较及分析.所比对的数据库为Si1.va1.06版.2结果与讨论3. IDO对A/0反应器去除有机物和氮磷的影响A/0反应器启动成功后稳定运行近半年的时间.A、B两组反应器内的A段和0的污泥浓度（M1.SS）分别保持在34g1.-I和56g1.-M1.VSS/M1.SS的比值在71%75%,污泥活性均较高.图2和图3分别为进、出水COD和氨氮浓度及其去除率随时间的变化.两个HRT下，A、B两组反应器出水的水质指标列于表2.可以看出，尽管进水的COD浓度波动较大，但COD的去除率保持稳定，A/0反应器具有良好的抗冲击性.出水的B0D5均低于5mg1.-说明A/0反应器对有
11、机物的生物降解比较彻底.HRT为20h时出水COD的去除效果优于30h.在HRT为20h时，A组反应器出水的COD(72.5mg1.-I14.8mg1.T)略高于B组反应器出水(68.7mg1.-I14.6mg1.-1.),COD平均去除率分别为67.0%和68.8%,TOC的去除率分别为64.4%和69.1%.说明低DO浓度下运行对有机物的去除没有显著影响.表2A、B反应器出水指标分析图3进、出水氨氮浓度及其去除率随时间变化反应器运行初期，低DO运行的A组反应器出水的氨氮浓度较高，说明硝化菌的活性降低,但经过3个月的运行后，两组反应器出水的氨氮浓度已经没有显著差别，氨氮的去除率均在90%以上
12、.2. 2反应器各段有机物和氮磷去除效率分析A、B反应器各段COD、NH+4-N.TN和TP的浓度变化如图4所示.A、B反应器的降解趋势基本一致.考虑到100%硝化液回流到A段，COD和氨氮在A段大约被稀释了一倍.COD和氨氮的降解主要发生在0段.有机物在。段基本完成降解，二沉池污泥絮凝沉降过程中，也会吸附一部分有机物,使COD浓度进一步降低.氨氮在。段发生硝化作用转化为硝态氮，硝态氮在A段发生反硝化作用转变为氮气，因此TN的去除主要发生在A段.0段也有一定的去除作用，说明在O段也有一定数量的反硝化菌.A组反应器TN的去除率（3K）略高于B组（26%）,B组反应器O段的高溶解氧回流会影响A段的
13、反硝化效果，从而影响TN的去除.反应器出水的TN以硝态氮为主，亚硝态氮一直保持在非常低的水平（小于O.07mg1.-1）,表明硝化反应进行得较为完全.出水硝态氮的增加主要来自氨氮和有机氮的转化.对于TN,左侧柱状图为反应器A,右侧为反应器B图4A、B反应器沿程COD、NH4-N、TN和TP浓度变化A/0反应器对于总磷的去除通过厌氧释磷、好氧吸磷最终排泥而去除.B组反应器TP的去除率略高于A组，分别为39%和34%,说明聚磷菌的活性均较强.出水总磷浓度低于1.OnIg1.达到城镇污水处理厂污染物排放标准一级标准.2.3A/0反应器进、出水溶解性有机物质组成分析SMP是由于基质代谢（通常与生长相关
14、）和污泥衰减释放的一类有机化合物，对于生化处理污水的出水水质和处理效率有重要影响，其主要成分为腐殖酸，多糖和蛋白质13.进水中SMP所占COD的质量分数为30%左右，出水SMP对COD的贡献增至70%75%.进水及A、B反应器出水SMP各组分的浓度变化如图5所示.多糖和蛋白质的降解主要依靠微生物自身的代谢，而腐殖酸几乎不能被微生物利用，只能依靠排泥去除.蛋白质最容易被微生物利用，其次是多糖，去除率分别为61.3%和48.9%,腐殖酸的去除率只有16.5%.A.B反应器对蛋白质和腐殖酸的去除效率基本相同，低DO运行的A反应器对多糖的降解效率比B反应器高20%左右.图5进、出水SMP各组分的变化对
15、反应器进出水进行3D-EEM扫描，结果表明进水中主要有3个峰，分别对应为酪氨酸类物质、色氨酸类物质和SMP类物质14.经过A/0反应器处理后，色氨酸类物质的峰基本消失，水中主要为酪氨酸和SMP物质，峰的强度较进水均显著减小，表明这些物质已被生物降解.A反应器出水峰的强度略高于B反应器出水.2.4不同DO条件下反应器0段污泥微生物种群结构解析表3为A、B反应器0段污泥样品的454测序结果.其中丰富度指数Ace和Chao1.是估计群落中含有OUT数目的指数，生态学中常用来估计物种总数.多样性指数ShannOn和SimPSOn用来估计群落中OUT多样性高低的群落多样性指数.Shannon值越大，Si
16、mpson越小，说明群落多样性越高.从表3数据可以看出，高DO运行的反应器B具有较高的菌群丰度和多样性，表明较高的DO浓度有利于好氧菌的生长和繁殖.表3细菌种群多样性指数特征1)在门的水平，两个反应器。段污泥细菌种群分布如图6所示.主要优势菌群依次为变形菌门(Proteobacteria)浮霉菌门(P1.anctomycetes)拟杆菌门(Bacteroidetes)绿弯菌门(Ch1.orof1.exi)酸杆菌门(Acidobacteria)放线菌门(Actinobacterium)蓝藻门(Cyanobacteria)绿菌门(Ch1.orobi)厚壁菌门(Firmicutes)芽单胞菌门(Gemmatin1.onadeteS)和硝化螺旋菌门(Nitrospirae).变形菌门、浮霉菌门和拟杆菌门菌群所
