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1、ICSCCS点击此处添加CCS号B54地方标准DB54/TXXXXXXXX羊肚菌菌种生产技术规程（征求意见稿）（本草案完成时间：）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。XXXX-XX-XX 实施XXXX-XX-XX发布西藏自治区市场监督管理局发布目次前言III1范围12规范性引用文件13术语和定义14菌种生产要求14.1 场地、厂房要求14.2 生产设备25母种生产25.1 菌种来源25.2 培养基配方25.3 容器25.4 4培养基配制25.5 分装和灭菌25.5.1 斜面培养基分装和灭菌25. 5.2平板培养基分装和灭菌25.6 接种25.7 培养35.8 贮存36
2、原种生产36. 1原料选择36.6 培养基配方36.7 培养基制备36.8 装袋和灭菌36.9 接种36.10 培养36.11 贮存37栽培种生产37. 1原料选择37.6 培养基配方37.7 培养基制备47.8 装袋和灭菌47.9 接种47.10 培养47.11 贮存48. 检验48.6 母种感官要求见表148.7 原种和栽培种感官要求见表2-1刖百本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由西藏自治区农牧科学院提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所、西藏自治区高原生物研
3、究所。本文件主要起草人：谢荣、徐爱国、张君丽、白玛旦增、孙慧娟、高磊、朱雪峰、王文海。羊肚菌菌种生产技术规程1范围本文件规定了羊肚菌菌种生产技术要求。本文件适用于羊肚菌母种、原种和栽培种生产技术。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4806.7食品安全国家标准食品接触用塑料材料及制品GB5749生活饮用水卫生标准GB50073洁净厂房设计规范NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1731食用菌菌种良好作业规范NY/T174
4、2食用菌菌种通用技术要求NY/T1935食用菌栽培基质质量安全要求3术语和定义以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 羊肚菌子囊菌亚门、盘菌纲、盘菌目、羊肚菌科、羊肚菌属统称，人工条件下栽培可获得子实体的以六妹、七妹、梯棱羊肚菌为主。3.2 菌种通过生产试验验证具有特异性、一致性和稳定性的羊肚菌菌株，可在适宜基质上生长并具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。3.3 母种经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。3.4 原种由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。3.5 栽培种由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，栽培种只能用于栽
5、培，不可再次扩大繁殖菌种，也称三级种。4菌种生产要求4.1 场地、厂房要求选择地势高，通风良好，给排水通畅，交通便利场地。厂房有各自隔离的摊晒场、原料库、配料搅拌区、装袋区、灭菌区、冷却区、接种区、发菌区和冷藏库。地面防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有排水排气系统；墙壁和吊顶应防潮、防霉、防水，易清洗；符合GB50073和NY/T528相关规定。水源符合GB5749相关规定。4.2 生产设备电子秤、搅拌机、装袋机、高压灭菌锅、臭氧发生器、超净工作台或接种箱或百级净化层流罩、恒温培养箱、培养架等常规接种器具齐全。5母种生产5.1菌种来源从有相应资质的供种单位引进，选择种性稳定、抗逆性强且适宜
6、本地栽培的菌株，菌种质量应符合NY/T1742的规定。5.2 培养基配方马铃薯20%,葡萄糖2%,琼脂2%蛋白陈0.05%,水IoOOnl1,PH值自然。5.3 容器试管选用15mm150mm或者18mm180mm；培养皿选用直径9cm玻璃培养皿或一次性无菌塑料培养皿。5.4 培养基配制马铃薯去皮切块后，煮至酥而不烂，8层纱布过滤，定容，加入葡葡糖、蛋白陈、琼脂，用玻璃棒搅拌均匀。5.5 分装和灭菌5 .5.1斜面培养基分装和灭菌分装培养基至试管1/4处，用脱脂棉塞或硅胶塞封口，每7支试管为1把，牛皮纸或报纸包扎棉塞，橡皮筋扎紧，口朝上放置于灭菌锅内。121C122C,灭菌20min30min
7、结束后冷却至60C左右，戴隔热手套取出试管，在灭过菌的超净工作台上摆斜面，斜面长度不超过试管长度的2/3,自然降温凝固后抽取5%的试管，于28下培养48h,无菌落长出为灭菌合格。6 .5.2平板培养基分装和灭菌培养基装入50OnII三角瓶至1312处，用棉塞或硅胶塞封口，牛皮纸或报纸包扎，橡皮筋扎紧，玻璃培养皿需用报纸包好，一并放入灭菌锅。121C122C,灭菌20min30in结束后冷却至60左右，戴隔热手套取出三角瓶，在超净工作台上分装至无菌培养皿中，培养基占培养皿面积的2/3。5.6 接种在超级工作台或接种箱内接种，接种前用紫外灯照射30min后，75%的酒精进行表面消毒。接种3mm5m
8、m菌块到转接试管斜面和培养皿中央，整个过程按照NY/T528规定严格无菌操作，培养皿需石蜡封口膜密封。贴好标签并做好记录。5.7 培养生化培养箱恒温IOeT2,培养7dIOd,按照NY/T1731规定，于接种后第3d、第5d和长满培养基后分别进行检查,4dIOd即可长满试管斜面，5dIOd开始形成菌核。5.8 贮存培养好的母种应置于2C保藏，最长不超过3个月。6原种生产6.1 原料选择主料小麦、辅料熬皮、谷壳、棉籽壳、石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T1935的相关要求，水应按照GB5749的规定执行。6.2 培养基配方青棵或小麦粒90%、谷壳3乐腐殖土5%,石灰1乐石膏现；吉棵或小麦粒68%、
9、棉籽壳20%、款皮10%、石灰1乐石膏l%o6.3 培养基制备小麦预先用3%石灰水浸泡2d3d,软化后捏开无“白芯”换水冲洗23次，控水，加入配方中其他原料，搅拌均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值6.57.5。6.4 装袋和灭菌采用规格13CmX25CnlXO.005Cnl聚丙烯折角单口开菌袋，培养基在4h内装完，袋料上紧下松、料面平整，袋口用颈环、套盖及无棉盖体封口。121C122,0.110.12UPa,高温高压灭菌3h。6.5 接种料袋冷却至30C以下，转运至接种区，事先进行环境、人员、母种、菌包消毒，按照NY/T528规定严格无菌操作将母种接到菌包中。6.6 培养
10、室内保持避光，室内保持避光，每天通风2次，每次30min;温度控制在I(TC20,空气相对湿度控制在40%50%,20d长满料袋。6.7 贮存培养好的原种应置于2C保藏，最长不超过50d07栽培种生产7.1 原料选择主料小麦、辅料皴皮、谷壳、棉籽壳、石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T1935的相关要求，水应按照GB5749的规定执行。7.2 培养基配方小麦60%、棉籽壳28%效皮10%、石灰1%、石膏1%。7.3 培养基制备小麦预先用3%石灰水浸泡2d3d,软化后捏开无“白芯”换水冲洗23次，控水，加入配方中其他原料，搅拌均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值6.57.5。7.
11、4 装袋和灭菌采用规格17CmX23CnlXO.005CnI聚丙烯折角单口开菌袋，采用双冲压立式装袋，培养基在4h内装完，袋料松紧一致、中间打孔、料面平整，袋口用颈环、套盖及无棉盖体封口121C122C,0.llO.12UPa,高温高压灭菌3h。7.5 接种冷却至30以下，转运至接种区，事先进行环境、人员、固体原种、菌包消毒，按照NY/T528规定严格无菌操作将固体原种或液体原种接到栽培种菌包中。7.6 培养室内保持避光，室内保持避光，每天通风2次，每次30min;温度控制在10C2（C,空气相对湿度控制在40%50%,20d长满料袋。7.7 贮存培养好的原种应置于2C4C保藏，最长不超过50
12、d08检验8.1母种感官要求见表1表1羊肚菌母种感官要求项目要求容器洁净、完整、无损棉塞或硅胶塞干燥、整洁、松紧适度、能透气滤菌培养基装入量试管总容积1/4,培养皿高的31/2菌种外观菌丝生长量长满斜面或平板菌丝体特征洁白、绒毛状、有少量淡黄色菌核菌丝体分泌物无菌落边缘整齐杂菌菌落无虫（蜻）体无斜面或平板背面外观培养基无干缩，颜色均匀，无暗斑气味羊肚菌特有的清香味、无异味表2羊肚菌原种和栽培种感官要求项目要求容器洁净、完整、无损棉塞或无棉盖体干燥、整洁、松紧适度、能透气滤菌培养基上表面距袋口的距离(505)nun菌种外观菌丝生长量长满至袋底菌丝体特征均匀、白色至浅黄褐色菌丝分泌物无，允许少量白色水珠培养基紧贴袋壁、无干缩菌核粒状或片状白色至浅黄褐色杂菌菌落无虫（螭）体无气味羊肚菌特有的清香味、无异味
