海洋动物资源线粒体DNA遗传多样性监测技术规程_地方标准.docx
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1、11B37山东省地方标准DB37TXXXX-XXXX海洋动物资源线粒体DNA遗传多样性监测技术规程CodeofpracticeformonitoringmitochondrialDNAgeneticdiversityofmarineanimalresourcesXXXX -XX-XX 发布XXXX-XX-XX实施山东省市场监督管理局发布前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14监测程序15监测方案设计26样品采集、保存与运输2K1采样地点2ft9采样数量及方法2RR采样记录3R4样品保存与运输37样品检测37I方法原理37t)DNA提取374DNA质量检测374引物选择37GDNA扩增
2、47APCR产物回收、纯化与序列测定48质量控制49数据分析410监测报告4附录A(资料性)样品采集记录5附录B(资料性)设备与试剂6B.1仪器设备与耗材6B.2试剂及其配制6附录C(资料性)酚一氯仿法提取DNA7附录D(资料性)琼脂糖凝胶电泳8附录E(资料性)PCR扩增反应体系9附录F(资料性)检测记录10参考文献11本文件按照GB/TL1-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省海洋局提出并组织实施。本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。海洋动物资源线粒体DNA遗传多样性
3、监测技术规程1范围本文件确立了海洋动物资源线粒体DNA遗传多样性监测程序,规定了监测方案设计、样品采集、保存与运输、样品检测、质量控制、监测报告等技术要求,描述了数据分析方法。本文件适用于海洋动物资源的遗传多样性监测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T12763.6海洋调查规范第6部分:海洋生物调查GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。11遗传多样性geneticd
4、iversity种内不同群体之间或一个群体内不同个体的遗传变异总和。4监测程序海洋动物资源线粒体DNA遗传多样性监测程序包括监测方案设计、样品采集、保存与运输、样品检测、质量控制、数据分析、监测报告,程序见图1。监测方案设计(见第5章)样品采集、保存与运输(见第6章)样品检测(见第7章)质量控制(见第8章)数据分析(见第9章)监测报告(见第10章)图1监测程序图5监测方案设计明确监测海域、监测周期、监测时间、样品采集、保存和运输、样品检测方法、监测指标、质量控制、数据分析、监测报告等。其中,对调查海域某种野生海洋动物资源的遗传多样性监测,宜每5年10年开展1次;对人工增殖物种宜每年开展1次。6
5、样品采集、保存与运输A1采样地点采样地点可根据调查需求选择:a)现场调查采样:按GB/T12763.6规定执行。对海洋底栖动物、潮间带动物进行定点采样,对移动迅速的底栖动物可设地笼诱捕。对游泳能力强的鱼类、甲壳类等进行拖网采样;b)非现场调查采样:从调查海域捕捞作业船、渔港或市场直接采集来自目标海域的新鲜渔获物,采样方法按GB/T18654.2规定执行。A)采样数量及方法按形态学分类后,每个调查海域应采集同一物种30个以上独立个体作为一批样品;保护动物和珍稀濒危动物难以达到该数量的,可积累该海域一定时期内多次调查采集的不同个体,以实际采集到的个体数为准。根据监测对象不同,可分别选择以下采样方法
6、:a)通常采取海洋动物整体;b)对大型海洋动物实行部分采样,取肌肉组织约0.5g;c)对海洋保护动物、珍稀濒危生物实行非致死性采样: 视监测生物的具体情况,无菌操作剪取部分鱼类鳍条组织约0.1g,或用无菌注射器于尾静脉处抽取血液约0.5mL; 贝类无菌取小部分外套膜组织; 蟹类用无菌注射器从第3步足基节关节膜处刺入抽取血淋巴0.1mLoA1采样记录采集的每批样品分别填写样品采集记录,格式参见附录A。A4样品保存与运输整体采样的个体应保持完整:部分采样的组织应每个个体独立包装。采样后宜立即冷冻保存,不具备冷冻条件的4C10C冷藏,冷藏时间不宜超过24h0样品运输过程中应保证温度在10C以下.体积
7、小于ICnI3的样品或组织,可量取加入10倍以上体积的乙醇(95%以上)或商品化的样品保存溶液浸泡,常温保存与运输。7样品检测71方法原理利用聚合酶链式反应(polymcrascchainreaction,PCR)技术、脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)测序技术和生物信息学分析技术,对海洋动物线粒体DNA中进化速度最快的部分序列,通常采用线粒体控制区(DTooP)序列,不适用D-LoOP序列的物种可采用细胞色素b(cytochromeb,Cytb)、细胞色素氧化酶I(CytochronieoxidaseI,COD基因或其他线粒体基因序列,进行单核甘酸多态性分析,获
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