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1、 糖代谢异常的实验室检查糖代谢异常的实验室检查【高血糖状态】【高血糖状态】DM（diabetes mellitus,DM）是一组以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合征。要对DM、糖耐量减退（IGT）、空腹血糖异常状态（）、低血糖症（hypoglycemia）或胰岛素抵抗（insulin resistance）等作出诊断，明确病因，必须在广泛收集临床病史和详细体格检查的基础上，辅以必要的实验室检查或特殊检查。一、血糖测定一、血糖测定 临床上血糖的测定，检测的是血液中的葡萄糖含量（浓度），标本可以是全血、血浆或血清，血液可来源于外周静脉血，毛细血管血或动脉血。血标本中有无细胞成份等，测得的糖浓度有一定
2、差别，如全血葡萄糖要比血清葡萄糖低15%20%。1.血标本的收集血标本的收集 血标本来源包括：毛细血管血、静脉血或动脉血。由于组织利用葡萄糖和不同血细胞比积的影响，静脉血糖值低于毛细血管的血糖值，后者又低于动脉血糖值。采集后应即刻保藏于冰箱内，以免室温条件下血中葡萄糖分解（约每h降低70mg/L），在4时每h降低20mg/L，故在临床上应尽量立即或在1h内送检。2.毛细血管血糖毛细血管血糖 毛细血管血的成分与动脉血相近，其血糖含量在清晨空腹时与静脉血基本相符；而在进食碳水化合物后2h内比静脉血高。正常人口服葡萄糖100g后，毛细血管血和静脉血葡萄糖含量的差值为861mg/dl，平均24mg/d
3、l。在服糖3h后一般两者差别很小。3.快速血糖测定快速血糖测定 目前常用的有光感应型如Lifescan Surestep（美国强生公司，One Touch）、和生物感应型血糖测定仪，如Accu-Chek Advantage(Boehringer Mannheim)，这些方法均是将葡萄糖氧化酶固定在固相携带体上如染料-试剂试纸条。血糖仪的优点是快速，也可反映血糖的变化情况，但不能用来诊断DM或用于研究。二、口服葡萄糖耐量试验二、口服葡萄糖耐量试验 1.原理：（oral glucose tolerance test,OGTT），正常人一次食入大量葡萄糖后（国际标准剂量为75g，儿童剂量1.75 g
4、/kg，最大75g），其血糖浓度略有升高，一般不超过8.88 mmol/L（160mg/dl），于2h内恢复正常，这种现象称为耐糖现象。若食入大量葡萄糖后，2h内不能恢复到正常水平者即称为糖耐量减低。OGTT 2.葡萄糖口服用量:负荷量有100g、75g、50g等方法。WHO推荐非妊娠成人服75g葡萄糖，以减少100g葡萄糖引起的胃肠道反应（恶心、呕吐）及50g葡萄糖负荷量不足（第二h血糖偏低）的缺点。妊娠时作OGTT则仍用100g葡萄糖口服为宜。儿童11.5岁以下2.5g/kg，1.53岁 2.0g/kg及312岁 1.75g/kg，最大量不超过75g。但必须注意，葡萄糖粉一般含一个分子的水
5、分子，故其实际重量应为82.5g。宜用无水葡萄糖粉。部分医院用葡萄糖液体代替葡萄糖粉。OGTT 3.试验方法及步骤：OGTT空腹时间不能少于10h，也不应超过16h，可以饮水。为避免恶心及呕吐，葡萄糖可稀释成25%的浓度，但仍有10%病人有恶心。少数病人（20 years for glycemic control with HPLC5%5%A1a and A1b:concentrationvery low HbA1c 形成的动力学寿命：120 days.50%的HbA1c值与过去30天内的平均血糖水平相关 40%的HbA1c值与过去31 90 天平均血糖水平相关.只有10%HbA1c 与 过去
6、91 120天平均血糖水平相关.平平均均血血糖糖水水平平(mg/dl)糖糖化化血血红红蛋蛋白白水水平平（%）糖化血红蛋白每变化糖化血红蛋白每变化1%所对应的平均所对应的平均血糖的变化为血糖的变化为30mg/dl.(二二)HbA1c的测定方法和影响因素检测方法 阳离子交换树脂微柱层析法阳离子交换树脂微柱层析法 HPLC（高压液相分析）电泳法电泳法 亲和色谱微柱法亲和色谱微柱法 放免法放免法 免疫比浊法免疫比浊法 免疫竞争抑制法免疫竞争抑制法微柱内的阳离子交换树脂是目前国内应用较为广泛的方法。在PH近7时树脂解离后带阴电荷，而Hb解离后带阳电荷，二者可形成离子键。由于GHb的阳电荷比HbA少，与树
7、脂的结合力相对低，容易被洗脱。用分光光度计分别测定洗脱液中GHb和溶血物中总Hb的吸光率（A），可计算出GHb占总Hb百分比。检测方法 各方法测定的糖化血红蛋白组成各不相同，但以高压液相分析（HPLC）为最可靠。由于测定方法各异，结果的可靠性各不相同，可比性较差。国际临床化学和实验医学联盟（IFCCIFCC）于1996年发布了糖化血红蛋白测定的统一方法和评价参考系统。HPLC方法 目前HPLC法测定HbA1c使其准确性和重复性得到很大的提高。美国 临床化学协会（AACC）糖化血红蛋白标准化分会和IFCC HbA1C标准化工作组建议，HPLC方法可作为检测糖化血红蛋白的金标准，希望以此使大多数的
8、实验方法能够参照“指定的方法”实现标准化。以免疫分析为基础的仪器（DCA200）在最近几年得到推广，大约在数min内就能读取数据，并且仅使用少量的毛细血管血标本。影响因素血红蛋白分子病、地中海贫血、溶血性贫血、怀孕等红细胞寿命缩短，从而糖化血红蛋白的量降低；肾功能不全、慢性酒精中毒等减慢HB的代谢，使其寿命延长，从而使糖化血红蛋白的量增加。注意点注意如下三点：根据IFCC和AACC的建议，糖化血红蛋白的名称统一用“糖化血红蛋白”（glycohemoglobin，GHb）表述；GHb以HbA1c所占的百分率（%）表示；其他报告也要转换或HbA1c%来表述。(三三)HbA1c用于糖尿病的诊断诊断：
9、优点 比血糖检测稳定性好，精确度高，实验室变异系数小 个体内变异率小，日间差仅/3)542 72.6 97.5%的新发儿童1型糖尿病患者可检测到自身免疫性抗体；大多数是多种抗体阳性。2）自身抗体对成人迟发性1型 糖尿病的诊断意义 成人迟发性1型糖尿病（LADA)是1型糖尿病的一种，目前对其诊断指标尚未完全统一。一般指发病年龄35岁，发病时没有酮症，发病半年内不需要胰岛素治疗，但起病后Bcell功能逐步衰减，一般在56年后大多（94%)需要都需要胰岛素治疗。病理上亦表现为胰岛炎。发病时自身抗体的检测对LADA的诊断具有重要作用，有人认为自身抗体阳性是诊断LADA的必备条件。a)只有5%10的2型
10、糖尿病自身免疫抗体阳性；b)58的LADA表现为单一抗体阳性；c)51成年发病的1型糖尿病为单一抗体阳性；只有14的儿童糖尿病为单一抗体阳性，LADA的抗体滴度明显低于典型的1型糖尿病。d)IA-2A在LADA检出率低，几乎与其他抗体同时存在。4 IVGTT-胰岛素释放试验（IVGT-IRT）该方法与IVGTT相同，在1分钟静脉注射葡萄糖（0.5g/Kg），然后分别在0分钟、3分钟、5分钟、8分钟、10分钟和20分钟等时间抽取静脉血分别检测血糖和胰岛素，观察胰岛素动力学第一和第二时相的变化，评估B细胞功能，试验一般观察20分钟，重点用于评价胰岛素第一时相的变化。正常人静脉注射葡萄糖后胰岛素的分
11、泌q 第一时相：快速分泌相第一时相：快速分泌相q 细胞接受葡萄糖刺激细胞接受葡萄糖刺激,在在0.5-0.5-1.01.0分钟的潜伏期后分钟的潜伏期后,出现快速出现快速分泌峰分泌峰,持续持续5-105-10分钟后减弱分钟后减弱.反映反映 细胞储存颗粒中胰岛素细胞储存颗粒中胰岛素的分泌的分泌q 第二时相：延迟分泌相第二时相：延迟分泌相q快速分泌相后出现的缓慢但持久的分泌峰快速分泌相后出现的缓慢但持久的分泌峰,其峰值位于刺激后其峰值位于刺激后3030分钟左右分钟左右.反映新合成的胰岛素及胰岛素原等的分泌反映新合成的胰岛素及胰岛素原等的分泌30020010000 20 40 60 80 时间时间(分钟
12、分钟)血血 浆浆 胰胰 岛岛 素素第一第一时相时相第二第二时相时相葡萄糖葡萄糖=7.9mmol/Lpmmol/LAIR glucose:loss of 1st phase insulin response in subjects progressing from normal state towards type 2 diabetesBrunzell JD,et al.JCEM 42：222，1976minAcute insulin response,%5 稳态模型（稳态模型（homeostasis model assessment）HOMR-B=空腹胰岛素（U/ml）20/空腹血糖（mmol
13、/L）3.5该公式测定空腹胰岛素或C-肽和血糖便 可计算，其结果与正常血糖钳夹试验和 OGTT相关性较好，可作为临床和科研 选用，但在IGT人群中可能高估B细胞 的分泌功能。6 高葡萄糖钳夹技术（HGCT）1979年DeFronzo等首次阐述了HGCT，首先通过葡萄糖输注迅速将血糖值升高至某一水平，再持续输注外源性葡萄糖，维持血糖处于高水平平台，引起相应胰岛素分泌的改变，分析B细胞功能。6 高葡萄糖钳夹技术（HGCT）具体操作：通过输注20%的葡萄糖，在015分钟内，使血糖迅速升高达一定水平（10mmol/L以上），然后通过计算机操纵的输注泵，调整葡萄糖的输注率，维持高血糖平台120分钟。前1
14、0分钟每2分钟抽血一次，以后每10分钟一次。B细胞功能以血浆胰岛素反应（I）表示，I0-10反应胰岛素早期分泌功能，I10-120反应胰岛素晚期分泌功能，一般可以其均值表示。该试验操作繁杂，费用高，不适宜大规模临床应用，仅用于一定个体的研究工作。7 磺酰脲类药物刺激试验主要包括有D860（3.0g）或优降糖（7.5mg），空腹一次口服，服药前，及服药后30分钟、1小时、2小时、3小时测血糖和胰岛素。大多数2型糖尿病患者早期胰岛B细胞胰岛素分泌存在选择性对葡萄糖刺激失敏感，而对磺酰脲类药物有反应，表现口服葡萄糖后，胰岛素分泌障碍，血糖明显升高，而口服磺酰脲类药物后胰岛素明显升高，血糖明显下降，提
15、示糖尿病早期，胰岛细胞选择性存在葡萄糖摄取或代谢障碍。7 磺酰脲类药物刺激试验须注意：本试验存在一定的危险性，一些患者服药后血糖可能大幅度下降，甚至出现低血糖者，应注意观察，做好静脉注射葡萄糖的准备。8、胰高糖素-胰岛素-C肽刺激试验 胰岛细胞对许多不同的刺激物反应不一，许多2型糖尿病患者发病时和继发性磺酰脲类药物失效时，细胞对葡萄糖和磺酰脲类药物的反应降低，而对胰高糖素的反应正常，提示胰岛细胞储备功能正常，提示许多继发性磺酰脲类药物失效者部分可能由于细胞对磺酰脲类的敏感性下降。8、胰高糖素-胰岛素-C肽刺激试验 其方法是：空腹采血测血糖和C-肽，静脉注射胰高糖素1mg，6分钟后抽血测C肽和血
16、糖。一般认为6分钟时血C-肽0.6nmol/L表示胰岛B细胞功能尚可，无需胰岛素治疗，如C-肽0.6nmmol/L，需改胰岛素治疗。8、胰高糖素-胰岛素-C肽刺激试验 本试验与OGT-IRT和进餐刺激相比，胰高糖素试验具有更好的可重复性，并且可以刺激胰岛B细胞更快地产生应答反应（6分钟达峰值），明显缩短了观察时间且不受胃肠排空的影响。NDT2DM40yrINS(-)T2DM40yrINS(+)T2DM40yrINS(-)T1DMP0.001P0.001P0.05P0.05C-peptidepmol/lng/ml2.41.81.20.6胰高糖素试验9 血浆胰岛素原 胰岛素前体物质包括前胰岛素原、胰岛素原及其裂解产物。B细胞功能下降时，PI分泌升高，刺激后更明显。使用放射免疫法测定正常人空腹PI/I比值为15%30%，而在2型糖尿病人中为30%50%。高PI血症出现较早，甚至出现于糖耐量正常的糖尿病家属中。胰岛素原是反映B细胞功能缺陷的指标之一。10 血C肽测定 C-肽与胰岛素一起由胰岛细胞等摩尔分泌入血循环，C肽的半衰期比胰岛素长，约11.113.5分钟。测定血中C肽是研究B细胞功能的一
