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1、ICS 61.060Y 78OB中华人民共和国国家标准GBr380172019/ISO16187:2013鞋类和鞋类部件抗细菌性能评估试验方法FoOtWearandfootwearcomponents-Testmethodtoassessantibacterialactivity(ISO16187:2013,IDT)2019-08-30 发布国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会 发布2020-03-01实施www.biao-z标准不载网GBT380172019/ISO16187:2013-IX.-A刖三本标准按照GB/TL12009给出的规则起草。本标准使用翻译法等同采用IS01618
2、7:2013鞋类和鞋类部件抗细菌性能评估试验方法。与本标准中规范性引用的国际文件有一致性对应关系的我国文件如下：GB/T27032017鞋类术语(ISo19952:2005,NEQ);GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法(ISO3696:1987,MOD)o请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国制鞋标准化技术委员会(SAC/TC305)归口。本标准起草单位：中国皮革制鞋研究院有限公司、琪尔特股份有限公司、佛山林至高分子材料科技有限公司。本标准主要起草人：张伟娟、李将元、王小刚、畅文凯。www.bi
3、ao-z标准不载网GB/T380172019/ISO16187:2013鞋类和鞋类部件抗细菌性能评估试验方法警示本标准中规定的试验方法需要使用细菌。只有经过微生物学培训且具有实践经验的专业人员在具备处理微生物技术条件的实验室才可使用本标准的微生物检测方法。考虑到具体国家的法律法规，应采取适当的安全措施。1范围本标准规定了评估鞋类和鞋类部件抗细菌性能的定量试验方法。本标准适用于所有使用非溶出抗菌处理的鞋类和鞋类部件。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。IS036
4、96分析实验室用水规格和试验方法(IVaterforanalyticallaboratoryuseSpecificationandtestmethods)ISO19952鞋类术语(FootWearVocabulary)3术语和定义ISO19952界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1抗菌活性antibacterialactivity材料或材料表面具有阻止或减缓细菌生长、减少细菌数量或杀灭细菌的功效。3.2对照样controlsample与试样相同但未经抗菌处理的材料。4安全性微生物的使用具有潜在风险，需要较高的技术水平并符合目前国家的法律法规。只有经过微生物技术培训的人员可开展该试验。应
5、严格遵守消毒杀菌行为法则和个人卫生。注：建议试验员了解IEC60068-2-10附录A人员风险，以及ISO7218o5材料与设备5.1 总则常规实验室设备及以下设备。GBT380172019/ISO16187:20135.2 生物安全柜。5.3 培养箱。温度可控制在(372)C5.4高压灭菌锅。5.5 湿度培养箱。温度可控制在(372)C,相对湿度不低于90%。5.6 紫外灯。5.7 广口瓶。具塞，100mL,可配合高压灭菌锅(5.4)使用。5.8 覆盖膜。不影响细菌生长或水分吸收，可用聚乙烯、聚丙烯或聚酯(聚乙烯对苯二酸酯)制作。膜厚为0.05mm0.10mm。5.9 漩涡振荡器。5.10振
6、荡器。二维或三维，可调至50rmin(5.11控温摇床。温度可控制在(372)C,频率为(12010)rmin.6试剂和培养基6.1 原则为确保试验结果准确，试剂和培养基应新鲜配制。注：可依据ISOIU33,或依据国家法律法规。试验用试剂应为分析纯和/或适合进行微生物试验。仅使用ISO3696规定的三级水。6.2 营养肉汤培养基(NB)6.2.1 成分牛肉膏3.0g;蛋白陈5.0g;氯化钠(NaCI)5.0g;水100OmLo6.22制备搅拌调节PH至7.20.2(室温)。在电热板或沸水浴中搅拌加热至成分完全溶解。用高压灭菌锅(5.4)在(1212)条件下灭菌15mino6.3 营养琼脂培养基
7、(NA)6.3.1 成分牛肉膏5.Og;蛋白陈10.0g;氯化钠（NaeD5.0g；琼脂15.0g;水IOoomLo注：若凝固不充分，可添加15g18g琼脂。6.3.2 制备搅拌调节PH至7.20.2（室温）。在电热板或沸水浴中搅拌加热至成分完全溶解。用高压灭菌锅（5.4）在（1212）条件下灭菌15mine将培养基冷却并描匀，倾倒至培养皿中。GBr380172019/ISO16187:20136.4 SCDLP培养基6.4.1 成分酪蛋白陈17.0g;大豆蛋白陈3.0g;氯化钠（NaCD5.0g；磷酸二氢钾2.5g:葡萄糖2.5g;卵磷脂LOg；吐温807.0g;水IOoOmlo若中和能力不
8、足，吐温80或卵磷脂的用量可进行调整，或添加其他中和剂。使用其他中和剂应记录名称和浓度。注：可选抗菌中和剂的选择评价信息见ASTNEl054和EN1040.6.4.2 制备搅拌调节PH至7.20.2（室温），用高压灭菌锅4）在（1212）C条件下灭菌15InirU6.5 氯化钠溶液（生理盐水）6.5.1 成分氯化钠（NaCD）8.5g;水IooomLo6.5.2 制备搅拌调节PH至6.90.2（室温），用高压灭菌锅（5.4）在（1212）C条件下灭菌15min。7试验微生物7.1 试验菌种以下菌种用于所有抗细菌试验。a)金黄色葡萄球菌(ASL89或ATCC6538)ob)肺炎克雷伯氏菌(ASL
9、1736或ATCC4352)。注1：根据客户要求，也可选用其他菌株作为试验菌株.但由于抗菌剂的不同效果，所选菌株需至少包括一种革兰氏阴性菌和一种革兰氏阳性菌。试验菌株应属于世界培养物保藏协会(WFeC)。菌种及其来源应在试验报告中注明。注2:AS属于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC),ATCC是美国菌种保藏中心。7.2 菌种保藏将菌种接种于营养琼脂培养基(NA)(6.3)上，在(372)C下培养24h。在(53)下保藏(不应超过1个月)，作为保藏菌种。每个月转接一次。菌种可依据供应商规范或EN12353进行保藏。GBT380172019ISO16187:20138接种液制备使用无菌接
10、种环，将一个菌落(7.2)移至20矶营养肉汤培养基(NB)(6.2)中，在(372)C描床(5.11)中培养约16h(隔夜培养)。使用显微镜或其他方法估算细菌的数量。准备含有1%营养肉汤(NB)(6.2)的生理盐水(6.5),用其制备细菌浓度为5-10)IO5CFU/mL的菌悬液。如有必要，接种液在冰上保存，并在4h内使用。9试样制备9.1 总则仅对声明抗细菌的部件或材料进行测试。若整鞋声明抗细菌，则对鞋的主要部件包括帮面、衬里、内底、内垫、外底分别进行测试。若仅声明一个部件中的一种材料抗菌，如果可以分离，则对材料进行测试。否则应测试整个部件。所取样的材料，面积应占材料或部件面积的80%以上。
11、若单一材料面积不足80%,需裁取2种主要材料。试样可直接从鞋材上裁取。9.2 试样试样的面积约50Onim2。对于方法A(见附录A),试样厚度应小于2.0mm。试样的面积和重量应在试验报告中注明。若试样面积较大，应按比例增加菌悬液的体积。若不可能减少试样的厚度(例如，试样较厚且不能在不改变其关键特性的情况下进行裁切，如表面形态会影响细菌与表面的相互作用)，需在试验报告中注明厚度。对于每个菌种，每种材料或部件至少需要6组试样。9.3 试样预处理仅在微生物负载高(污染)等必要时进行试样预处理。如需进行灭菌，要在报告中说明，灭菌方法不能影响材料本身的抗菌性能。注：试样和对照样可以用灭菌锅(5.4)在
12、(1212)C和103kPa条件下灭菌15min,或者紫外线紫外灯(5.6),30W,距样品300mm,每侧灭菌1h及其他合适的方法灭菌。10试验方法表1列出了不同情况所适用的试验方法。方法A（见附录A）仅用于吸水性材料。方法B（见附录B）仅用于非吸水性材料。方法C（见附录C）适用于吸水性及非吸水性材料，或组合型材料。注：对于单一材料，推荐使用方法A和方法B。表1试验方法序号材料类型试验方法备注1吸水性菌液吸收法（附录A）织物和皮革2非吸水性膜接触法（附录B）微孔材料，如贴膜革或重革，合成或人造材料，EVA发泡材料，PU发泡材料；致密材料，如塑料或包膜材料3吸水性和非吸水性振荡法（附录C）不同
13、的鞋类部件材料；成型材料；具有非溶出抗菌技术的材料GB/T380172019/ISO16187:201311结果表达鞋类或鞋类部件抗细菌性能用抗菌率分别表示。依据式（D计算抗菌率（R）,或依据式（2）计算RL结果保留3位有效数字，用百分数表示。R-100式中：c,24h或规定培养时间后，3个对照样菌落数的平均值，用CFU/mL表示。T,24h或规定培养时间后，3个试样菌落数的平均值，用CFU/mL表示。若没有合适的对照样，用以T。代替式（1）中C,的式（2）来计算R*:R-X100j-式中：To接种Oh后3个试样菌落数的平均值，用CFU/mL表示。12试验报告试验报告至少应包括以下内容：a）本
14、标准编号；b）试样及其位置、面积和重量：c）不同材料所用的试验方法；d）试样制备，包括不同样品的预处理方法（如果有），比如灭菌方法:e）菌种，不同材料试验菌种的编号和活菌数量；f）接种液中添加的表面活性剂及其浓度；g）结果有效性的判断；h）不同材料或部件的抗菌率；i）与本试验方法的任何偏差。GBT380172()19ISO16187:2013附录A（规范性附录）菌液吸收法A.1试验步骤A.1.1接种将6个试样和6个对照样分别置于无菌广口瓶（5.7）中。移取（1.00.DmL第8章制备的接种液于样品上，塞紧瓶塞。使用样本的数量取决于样品类型。若没有合适的对照样，在没有样品的广口瓶中接种作为对照样来判断试验的有效性。A.1.2接种后洗脱（0h）在3个接种后的试样和对照样（如果有）中加入20mLSCDLP培养基（6.4）。塞紧瓶塞，用约30Cln的摆幅晃动30s,或使用5sX5圈的漩涡振荡器（5.9）进行混合，将细菌洗脱至培养基中。A.1.3培养将3个接种后的试样和对照样（如果有）在（372）C条件下培养（24l）h.A.1.4培养后洗脱（24h）依据A.1.2进行。A.1.5活菌数量的测定表面培养用无菌移液管移取ImLA.1.2以及A.1.4制备的洗脱液至试管中，加入（9.00.1）mL生理盐水（6.5）摇匀。用生理盐水（6.5）稀释洗脱液制备10倍梯
