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1、血清总胆汁酸循环酶法测定法1 .实验原理胆汁酸会被3-羟幽醇脱氢(3-HSD)以及-硫代烟酰胺胭喋吟二核甘酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及-硫代烟酰胺服喋吟二核甘酸还原型(Thio-NADH)o此外生成的3-酮类固醇在3-羟密醇脱氢(3-HSD)及-硫代烟酰胺胭喋吟二核甘酸还原型(ThiO-NADH)存在下，生成胆汁酸及-硫代烟酰胺服喋吟二核苜酸氧化型(ThiO-NAD)。如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的-硫代烟酰胺服喋吟二核甘酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。2 .标本：2 .1病人准备：
2、标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。3 .2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。3 .标本存放4保存可稳定7天，-20保存可稳定3个月。4 .标本运输常温条件下避光保存运输。5 .标本拒收标准细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂南京波因特总胆汁酸测定试剂盒(试剂1:2X6OmI试剂2：220ml)2mmol1.30mmol1.6.1.1试剂组成试剂1(R1)：-硫代烟酰胺厥噂吟二核昔酸氧化型(Thio-NAD)Tris缓冲液试剂2(R2)：胭噂吟二核甘酸氧化型(NAD)2mmol1.3a-羟幽醇脱氢酶(3a-HSD)5U/1.6.1.2
3、试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂1.2 校准品：使用南京波因特公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品SOP文件。1.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AUlOOO生化分析仪8 .操作步骤：8 .1项目基本参数：参见AU100O生化分
4、析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AUlOoO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以南京波因特公司提供的TBA校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以Ilmol/1.报告。12 .参考值范围2：成年人：10mol/1.参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .
5、临床意义14 .操作性能14.1线性范围：1.06-90mol1.c14. 2精密度：批内精密度n=20X(umol/1.)S(mol/1.)CV(%)天间精密度n=20X(mol/1.)S(mol/1.)CV(%)样品17.00.223.14样品17.20.324.44样品220.80.432.07样品222.40.622.77样品350.40.881.75样品352.41.011.9314.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对79个样品进行TBA检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.999x+0.19mol/1.；r=0.999014 .4灵敏度
6、：本试剂的检测限为1.06mol/1.。15 .5病人结果可报告范围：1.06-90mol1.o16 .超出范围结果处理本法的检测范围为1.0690umol1.。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2o17 .病危报警值的处理18 .方法局限性17.1本法的检测范围为1.0690mol/1.。当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/1.氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。17 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度WlOomg/1.,胆红素W50mg1.,血红蛋白W5g1.,乳糜度W3000度时没有观察到干扰。18 .补救措施：当仪器发生故
7、障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. JungK,BohmM.Enzyme,23:201(1978)2. HafkenscheidJCM,DijitCCM.ClinChem,25(1):55(1979)3. TietzNW.Fundamentalsofclinicalchemistry,W.B.SaundersCo.,p674(1982)4. TsunodaT,EtoT,FurukawaM,NakataT,KusanoT,1.inY,TashiroK,WatabeS,TsuchiyaR.Clearandcolorlessfluidobservedduringpercutaneo
8、ustranshepaticgal!bladderdrainage.GastroenterolJpn1990;25:619-24.5. Keller,h.:klinisch-chemischeIabordiagnostikfurdiepraxis,2ndedition,georgthiemeverlag,Stuttgart,1991:246.6. ScientificTablesGeigy,partialvolumebodyfluids.Basel:Ciba-Geigy1977;8:136-43.7. KruisW,PaumgartnerG.Bileaciddepletionsyndrome.
9、DtArztebl1982;79:33-620.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清羟丁酸脱氢酶DGKC推荐方法测定1 .实验原理德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法。2-酮基丁酸+NADH+I=HDBH2-羟丁酸+NADt2 .标本：2. 1病人准备：无特殊要求。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3 .标本存放：3天内的活性损失：28保存：8%；1525保存：2%04 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6 .实验材料6. 1试剂：申能HBDH测定试剂盒(14132071701试剂1(6X64I
10、nI)试剂2(6X16ml)7. 1.1试剂组成试剂1(R1)：磷酸盐缓冲液pH7.850mmol1.2-酮基丁酸3mmol1.试剂2(R2)：NADH0.18mmol1.6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂己变质，不能继续使用。6.1.5注意事项试剂中含叠氮钠(095g1.)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6 .2校准品使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，
11、具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .3质控品具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。8 .仪器：奥林巴斯AU100O生化分析仪9 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见AU100O生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。I1.计算方法：以TrUCalU复合校准品a-HBDH校准值校准仪器后，在病人结果可报告
12、范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行a-HBDH活力检测，可以直接使用AA/min均值乘以计算因子得到结果。但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算a-HBDH活力的计算因子见下表：A/minX因子HBDH活力U/1.底物起始的反应（37C）样品起始的反应（37。C）340nm100797935334nm102758097365nm186771471412.参考值范围成人1.DH都升高：心肌损伤：a-HBDH1.DH0,9肝损害：a-HBDH1.DHO.6参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义门：-
13、羟丁酸脱氢酶（-HBDH）是乳酸脱氢酶的一种同工酶，它以-羟丁酸为底物。与乳酸脱氢酶的其它同工酶相比，-HBDH在心肌组织中含量很高，因此-HBDH对心肌梗死的诊断更敏感和更特异。为区别肝脏和心脏疾病，-HBDH/1.DH比率有助于肝病和心脏疾病的鉴别。实质性肝病的-HBDH/1.DH比率降低；而心肌梗死的-HBDH/1.DH比率升高。14 .操作性能14.1线性范围：3-1100U1.o1.1 2精密度：精密度的评估是根据NCC1.S推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1.S的规则。批内精密度n=20X(U/1.)S(
14、U/1.)CV(%)批间精密度n=20X(U/1.)S(U/1.)CV(%)样品11002.212.20样品197.82.202.25样品21742.971.71样品21772.011.14样品3884.201.08样品33866.961.8014.3 方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对64个样品进行-HBDH活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=l.00-l.00（U/1.）；r=0.99。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为3U1.o14 .5病人结果可报告范围本法对-HBDH活力检测的AAmin最大变化在340和334nm为0.15,在365nm为0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.的氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10015 .超出范围结果处理：本法对-HBDH活力检测的A/min最大变化在340和334nm为0.15,在365nm为0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.的氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以IO016 .病危报警值的处理：无。17 .方法局限性17 .1本法对-HBDH活力检测的A/min最大变化在340和334nm为0.15,在365nm为0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.的氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。18 .
