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1、HP阳性十二指肠溃疡组织中NoS的表达(医学论文)Hp阳性十二指肠溃疡组织中NOS的表达作者：范亮苗继延郑志汉樊代明杨云生【关健词】十二指肠溃疡关键同：一氧化氮合酶;十.指肠溃疡;螺杆菌，幽门；免疫组织化学摘要：目的探讨一氧化氮合成酪(N0S,包括n-cN0S,e-cNOS)在Ilp阳性的十二指肠溃疡(DU)组织中的表达及治疗前后的改变;探讨DU的发生与Ilp感染的关系并对其疗效、预后供应参考依据.方法采纳免疫组织化学方法对60例DU胃镜活检标本视察其NOS的表达，包括Ilp阳性30例，Hp阴性19例，DU治疗前Hp阴性经治疗后仍为阴性3例，DU治疗前Hp阳性经治疗后转为阴性8例.结果Hp阳性
2、的DU组织中NOS的阳性反应强度明显高于Hp阴性的DU组织n-cNOS:PlItjO-OlvsIlp(一).e-cN0ST2lt;0.01vsHp(一),治疗后Hp感染转阴者NOS的表达有不同程度的减低(n-cNOS:Pllt;0.01vs治疗前,e-c*)S:P2丘;0.05、3治疗前)，而治疗后HP感染仍为阳性者，则无差异.结论在Hp引起DU的发病机制中，NOS可能是其致病因素之一，根除Hp可使DU组织中NOS降低，NOS是否可作为一项DU疗效及预后的指标，值得进一步探讨.KeywordsinitricoxideSynthasejduodenalulcer,helicobac-terpyl
3、ori:immunohistochemistryAbstractiAlMTostudytherelationshipbetweennitricoxidssynthase(NOS)expressionlevelandHelicobacterpylori(Hp)infectioninpatientswithduodenalulcer(DU).METHODSNOSexpressionswerestudiedbyimmunohis-tochemicalmethod.60casesofDUweredividedinto4groups:30casesofUppositivepatients(group),
4、19casesofHpnegativepatients(groupB).3casesofHpPoSilivepa-tientswhowereprovedstillHppositiveaftertreatment(groupC).8caseofHpPoSitiVepatientswhowereprovedHpnegativeaftertreatment(groupD).RESU1.TSNOSexpressionlevelsinHppositivepatientsweresigniIicantlyhigherthanthoseinHpnegativepatientsn-cNOS:Pllt;0.Ol
5、vsHp(一).e-cN0S:P2lt;0.OlvsHp(一).IngroupC,theNOSexpressionlevelhadnochangesaftertreatment.IngroupD,theNOSexpressiondecreasedatdifferentlevelsaftertreatment(n-cN0S:PlIt:0.Olvsbeforetreatment,e-cN0S:P2It;0.05vsbeforetreatment).CONC1.USIONNOSmayplayaroleinthemechanismofDUcausedbyHpinfection.Itisworthyof
6、furtherstudyastowhetherNOScanbeusedassomeindexinthedignosisandprognosisofDU.0引言十二指肠溃疡(duodenalulcer.DlO发病机制困难，迄今尚未完全阐明.近年来多数学者认为幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)是引起DU的因素之一，流行病学调查结果亦支持这一结论口.在Hp感染所引起的Du的发病机制中有无NO的参加，目前对此报道不多.为此，我们采纳免疫组织化学方法检测了NOS(n-cN0S,e-cNOS)在Hp感染的DU组织中以及治疗前后表达的状况，为探讨DU的发生与Hp的关系，并对其疗效、预后
7、供应参考依据.1材料和方法1.l材料病理标本取自第四军医高校西京医院病理科所存1995-08/1997-02胃镜检查活检标本共计60例，其中包括Hp(+)的DU边缘组织30例，Hp(一)的DU边缘组织19例;DIJ治疗前Hp(+)经过治疗后仍为Hp(+)的DU边缘组织3例，DU治疗前IIp(+)经治疗后转为Hp(一)的DU边缘组织8例.全部为石腊切片，全部切片经病理科高年资医师再次阅片重新确诊.DU患者治疗方法:PO洛赛克(Omeprazole-Astra)20mg,2次#12539;d-l;阿莫西林(AmO)0.5g,3次#12539;dT,得乐冲剂(DeNol)HOmg,4次#12539;
8、dT疗程24wk,然后复杳胃镜，并检测Hp.n-cNOS,e-cNOS兔抗人多克隆抗体(I抗)为美国SantaCurz生物公司产品:ABC试剂及生物素化羊抗兔IgG(II抗)为华美生物工程公司产品;36一二宓基联苯胺(DAB)为瑞士Fluka公司产品.1.2方法采纳BC免疫随标记法2,抗血清(I抗)工作浓度为1:50,用未免疫牛血清做阴性比照，以PBS代替一抗作空白比照.Hp检测方法，采纳尿素旃法及组织学检测法，二者均为阳性方定为Hp感染阳性.NOS主要为胞质着色，偶有核着色，主要定位于粘膜内皮和血管四周，在固有层中也有部分着色(Figl).阳性反应按阳性细胞检出率及阳性反应强度两个指标进行半
9、定量分析.反应强度按如下结果判定：无着色者为阴性(一),浅黄色为弱阳性(+),黄褐色为中度阴性。，深黄褐色为强阳性O(Fig2).按有阳性反应的例数计算阳性反应率.图1一图2略统计学处理：采纳计算机SAS6.11版数据系统，阳性细胞检出率用四格表精确概率法，阳性反应强度采纳等级资料进行检验，两组样本采纳Wilcoxon等级资料比较，多组样本的两两比较的秩和检用Ne-menyi法.2结果2.1Hp阳性DU组织中n-cN0S,1.lcNOS的表达n-cNOS,e-cNOS在Hp(+)与Hp(一)的DU组织中阳性细胞检出率无差别(Pl=O.363,P2=0.067).反应强度比较:n-cNOS(u=
10、3.039gt;2.58,Pllt：0.01),e-cNOS(u=3.532gt;2.58,P2lti0.01);即即(+)与Hp(一)的DU组织中的反应强度有显著差异，说明Hp(+)DU组织中e-cNOS,n-cNOS的反应强度明显高于Hp(一)的DU组织(TabI).表lHp(+DU组织中n-cNOS,e-cNOS的表达略2.2Hp阳性DU治疗后n-1cNOS,oncNOS的表达n-cNOS在治疗前后DU组织中的阳性细胞检出率有差异(P1=0.036),即在治疗前n-cNOS表达高，而在经过治疗后Ilp感染转阴的溃疡组织中表达降低，e-cNOS则无差异(P2=0.170).阳性反应强度的比
11、较：治疗前Hp(+)DU的n-cNOS反应强度与治疗后Hp转阴的DU的反应强度有显著差异(PltOOl),即治疗后HP感染转阴者n-cNOS的反应强度明显减轻;而治疗后HP感染仍为阳性者，则无差异(Pg0.05).治疗前HP(+)Du的e-cNOS反应强度与治疗后Hp转阴的DU的反应强度有差异（Plt；o.05）,即治疗后Hp感染转阴者e-cN0S的反应强度有肯定程度的降低，而治疗后Hp感染仍为阳性者，则无差异（Pg0.05,Tab2）.3探讨1980年FUrChgOtt和ZaWad发觉内皮细胞能释放一种舒血管因子（EDRF）,但其结构和特性未得到证明，直到1987年Palmer等2和IgWo
12、等3分别证明EDRF是一种气体物质一氧化氮（NO）.NO是在左旋精第酸在NO合成酣（NoS）的作用下生成的，依据NOS生物学特性可将其分为两种，一种是原生酶（CNOS）,它有两种形式e-cNOS及n-cNOS,主要分布在内皮细胞、神经细胞、平滑肌细胞和血小板等，其活性受Ca2/CaM的调控，另一种是诱生酶（iNOS）,主要分布在内皮细胞、吞噬细胞、肥大细胞及各种免疫细胞等，其酶的活性不依嵬于Ca2/CaM的调控，但须要有诱导因子的存在4-7.NO作为一种神经递质和信使分子，具有多种生理功能.在胃肠功能调整方面M）起着重要作用8,9.一项体内探讨发觉，免疫系统中的NO在限制肿瘤生长中起重要作用1
13、0.有报告提示NOS表达与肝癌的增殖凋亡有关，在肝癌的发生、发展中起重要作用11.一项探讨证明较高水平NOS的表达提示在肝炎后肝硬化恶性转化及肝癌的进展中一氧化氮的产生起肯定的作用12.另一项探讨结果表明肝硬化大鼠胃肠道各段NoS表达是降低的13.大鼠应激后胃粘膜血流量与血浆内一氧化氮（NO）较比照组有明显下降14.NO具有扩张血管的作用，它可以通过增加胃粘膜的血流量来爱护胃粘膜15,16.作者另一探讨结果提示17,在Hp促进胃癌发生的过程中，可能有NO的参加，在Hp感染阳性慢性胃炎的发生中NO发挥肯定作用.有学者提出Hp感染与作为宿主部分免疫反应的反应氮类NO和过亚硝酸盐持续产物形成有关18
14、.近年来对消化性溃疡的病因和治疗的探讨提示，十二指肠溃疡的发病不仅与胃酸相关，而且与Hp感染有关，乙酰胆碱、组氨和胃粘膜固有层的免疫细胞和血浆细胞传递到效应细胞，NO可能是介导免疫细胞和上皮细胞之间相互作用的因子19.表2Hp（+）DU治疗后n-cN0S,e-cNOS的表达略我们采纳免疫组织化学方法检测NOS（包括e-cNOS,n-cNOS,能与人组织反应的iNOS缺售）在Hp感染的十二指肠溃疡组织中及治疗前后的表达状况.结果显示n-cNOS,e-cNOS在Hp阳性的十二指肠溃疡组织与即Hp性的十二指肠涉疡组织中表达的阳性细胞检出率无差异，但反应强度均明显增加，表明在Hp引起十二指肠溃疡的发病
15、机制中，NO可能是其致病因素之一.结果还显示经过治疗后Hp感染转阴的溃疡组织中n-cNOS的阳性细胞检出率降低，反应强度则明显降低，经过治疗Hp感染仍为阳性者，则无差异.经过治疗后Hp感染转阴的十二指肠溃疡组织中e-cNOS阳性反应强度有肯定程度的降低，而经过治疗Hp感染仍为阳性者，则无差异.结果提示根除Hp可使十二指肠溃疡组织中NOS降低，即在体内亦可诱导酶的活性，而且主要是n-cNOS降低.其机制可能是:NO与细胞产生的02-（过氧化物）相互作用，形成一种超氧亚硝酸化合物，这些化合物性质稳定，可分解其它细胞引起组织损伤的产物；No引起细胞核酸亚硝酸化，破坏DNA双螺旋结构;NO抑制某些与细
16、胞呼吸和DNA爱制有关的关键酶活性，使线粒体呼吸链的正常功能受到抑制和靶细胞中铁的丢失，表现出细胞毒性及组织损伤;NO作用于生物氧化过程中线粒体内的乌头酸梅和琥珀酸氧化还原酶时，可抑制细胞的生物氧化产能，从而影响细胞的生长、发育和增殖等，甚至引起细胞死亡.Hp感染阳性的十二指肠溃疡组织中NOS的表达降低，NOS是否可做为一项十二指肠溃疡疗效及预后的指标，值得进一步探讨.参考文献：1ZhouDY,YangHT,ZhangWD.Hclicobacterpyloriandgas-troduodenalulcerM.ShanghaizShanghaiKexueJishuChubanshe(Shanghai:ShanghaiScienceandTechnologyPress,)1992:276.2PalmerRMJ,FerrigeG,Moncadas
