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1、WatersXevoTQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1 .适用范围，本使用规位适用于有机室所备有的WatcniXcvoTQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。2 .仪卷设备的主要技术指标，I)梯度性能：保留时间标准偏差(SD)0.047min,2) ES1.正离子灵敏度和精密度：测试样晶：磺胺二甲基哒嗪(SU1.fiadimethoXine),浓度：0.1pg11.指标要求：平均信噪比(S/N)*000:1：平均峰面枳/OOO0：峰面枳相对标准偏差(%RSD)3.0%:保留时间标准偏一(SD)0.047min测试结果：信噪比(SN)!45(X)psi:峰面
2、积：120(X)():峰面积相对标准偏差(%RSD)：2.5%：保留时间标准偏差(SD)：OWmin,均符合指标要求。3) ES1.负离子灵敏度和精密度：测试样品:氟选素一(Ch1.OramPheniCoI),浓度:0.05pg,1.指标耍求:平均信噪比(S/N)2400:1：平均峰面积N100o:峰面积相对标准偏差(%RSD)3.0%;保留时间标准偏差(SD)0.047min测试结果：信噪比(WN):52()psi：峰面积：1500；峰面积相对标准偏差(%RSD):2.8%；保留时间标准偏差(SD)：0.00min,均符合指标要求.4)系统精密度(TUV7PDA)：峰面积相对标准偏差(%RS
3、D)0.5%;峰高相对标准偏差(%RSD)0.9%o5) NanoFIow正离子灵敏度指标要求：峰强1IO7,测试样品：G1.u-FibiinopeptideB.浓度：100fmO”1.测试结果：峰强度(mz=785.8)：1.48107:符合指标要求.6)TRIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADHT19,PHOT33.EN1.T4.BSAT59.EN1.T43.ADHT17,BSATIO.PHoT88指标要求：保留时间标准偏差：0.25%测试结果：ADHT19：标准偏差为0.02%(23.77min):PHOT33：标准偏差为OO3%(25.1.2min):EN1.T4：标准偏差为0
4、.02%(21.83min);BSAT59：标准偏差为0.01%(21.58Inin)；EN1.T43：标准偏差为004%(22.33min);ADHT17：标准偏差为0.03%(23.3Imin)：BST1()：标准偏差为0.02%(24.4Imin)：PHOT88：标准偏差为0.03%(24.8Imin)7)系统性能测试维系统精密度测试：测试样品17-OHP.-维保阳时间重复性(PDA)指标:保留时间标准偏差(SD):1.0s:维峰面积除曳性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(RSD):05%;一维峰高亚史性(PDA)指标:峰高相对标准偏差(%RSD):0.9%：二维系统精密度测试：测试样
5、品7-OHP.二维保留时间重熨性(PDA)指标:保留时间标准偏差(SD):W1.Os:二维峰面积近复性(PDA)指标：峰面枳相对标准偏差(RSD):0.5%;二维峰高重更性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD):90.0%3 .仪器设务的使用环境要求：I)电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。2)工作温度：19-22度，不要超过25C,保持恒温。3)相对湿度：50%-7()%4 .操作程序I4.1 开机4.1.1 打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和UP1.C各电源，各部件通过自枪后，双击工作站图标进入MaSSIVnX工作
6、站。4.1.2 选择InStnImen1.MSTUne进入调谐界而。从调谐界而选择VaCUUnpump,打开真空泵,开始抽真空,机械泵和涡轮分子泵开始工作.4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为叙色，不再闪燥，同时观察调谐界面DiagnoStiCSTUrbOSPeed泵转速达到100%即可，达到实5佥状态大约要抽真空4小时(注意：真空规，测fit工具，无异常状况通常无需打压已开(注：一定襄打开氨气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关高压和氨气)。4.4.2点击ES+Source.输入以卜各参数：Capi1.1.arj-(kV):3：Conc(V):30；Deso1.v
7、ationemp(C):550；Deso1.vation(1.hr):8(X)；Cone(1./Hr):50；以下参数最好直接使用intd1.istart自动校正仪器质量数时自动生的参数：1.MReso1.utionI:3；HMReso1.ution1:15：IonEnergyI:0.5：1.MReso1.ution2:3：HMReso1.ution2:15；IonEnergy2:0.5；Co1.1.ision:2o4.5 ESI调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。4.5.1 把调谐液放入A/B/C号位(注：浓度在0.1PPm之间,根据实际的灵敏度调整样品浓度4.5.2 把潦动相的潦速设为0.2
8、m1.min,有机相和水相比例为1:1。点击TUnC界面下的HUidiCS,点击PUrgeSyringe灌注注射器。设置InfUSiOn流速5u1.min.根据灵敏度可适当调整。设置F1.owState模式(Infii$ion:宜接进样：COmbined:液相和样品混合进样；1.C:液相进样：WaS1.C:废液)。4.5.3 选择XevoTQ-SMSDetector下面的Inte1.IiStart:Samp1.eTUneandDeve1.opMethod点击Starb调出界面，输入各参数.系统开始自动优化目标化合物的质谱参数.4.6 建立质谱的MRM方法.选择InsirumentMSMetho
9、d进入质谱方法编辑界面打开新建质谱方法窗口,再点击MRM,按调谐结果输入下列参数：廛子模式、化合物名称、母离子质量数、子离子质地数、离子驻留时间、徒孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。4.7 建立UP1.C方法.选择InsinimcnO1.nIctMethod进入UP1.C方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自幼进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UP1.C的方法命名保存。4.8 建立样品运行序列表，运行采集数据.在MaSSIynX主界面上点击Fi1.cNcw,新建序列表，输入文件名、注择、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体枳等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。4.9 处理取据.4.10 关机
10、一般质谱仪部分不需要关机，不用时只要保持在Standby状态下即可。但如果长时间不用，或是对仪港进行清洗和维修时需要关机。4.10.1 首先停出液相色谱流速.如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶.4.10.2 点击MSTUnC进入调谐窗口，点击Standby,关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。4.103等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。4.10.4选择OPtionVcnt,这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时观察调谐界面DK1.gnOStiCSrTUrbOSpeed泵转速为0时即可关闭旗谱电源。5 .仪器基本维护与使用注意事项：5.1 仪器室要
11、保持整洁、干净、无尘：配套设施布局合理。5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。5.3 溶剂和流动相的要求，所有的流动相都要用022m的滤膜过注，水相要用前新配，并不得超过两天.样品必须使用022wn的滤股过渡。5.4 ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ES1.离子化有抑制效应：:乙胺（TEA）在m/z102处有较强的M+H+峰,有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些喊性化合物在负离子ESI条件卜的响应。注意！卜.列的溶剂添加剂会产生.严重的离子化抑制，建
12、议禁用：强酸强喊、不挥发性酸及相应的盐（如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等）、表面活性剂、熟子对试剂。5.5 定期清洗样品锥孔:关闭隔断阀，取下样品稚孔,先用甲醉:水：甲酸（45:45:10）的溶液超声清洗20min,然后分别用超纯水和甲醉各溶液超声清洗10分钟，待晒干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时，需要清洗IOnBkKk、二级锥孔和RFIenSo5.6 实验完毕要清洗进样针、进样阀等，用过含酸的流动相后，色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗，延长仪罂寿命.仪器长时间不用，有管路用纯甲醇濯注。5.7 真空无油泵的密封圈1年更换1次.5.8 系统安全：注意！质谱连接的电脑禁止更改网络设巴，禁止安装防火墙。尽量避免使用U盘等移动存储设备。谙使用光盘刻录来完成数据的拷贝。6 .突发情况的处理操作时如果发生电脑死机的情况,股不需要关闭仪器部分，只需强制关闭电脑主机，田新启动电脑，连接工作站，即可恢匆正常.如果发生停电事故，一般UPS可以保障仪器不会马上断电，但应当根据停电时间长短,采取相应的措施。（长时间断电（3小时以上）建议停机）。
