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1、赛默飞U1.tiMate3000高效液相色谱仪操作及雒护保养规程一、操作规程1 .流动相的准备。按照分析方法配制或准备流动相，用0.45m微孔滤膜过滤后，超声脱气5分钟。将流动相放置在液相色谱溶剂盘中,将AsB、C泵吸液管分别放入甲醇、超纯水和缓冲盐溶剂瓶底部。2 .开机。在仪器背面从上到下依次打开泵、进样器、柱温箱和检测器单元的电源开关，打开电脑，等待约12分钟，变色龙服务管理器将会H动启动（或双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，点击“启动仪器控制器”激活服务管理器）。双击电脑桌面的aChrome1.eon图标，进入变色龙软件。3 .管路排气。向上掀开最上层泵单元前面板，拧松金黄色快速清
2、洗阀（逆时针两圈左右），在软件中设置通道比例为100%（其他通道比例设置为0）,然后点击“冲洗”，泵将以3.Om1.,min的速度自动快速冲洗泵管内残留的气体，2min后将臼动停止，观察流动相应连续、无气泡。同样设置需要使用的B、C泵通道比例为进行管路冲洗排气，冲洗结束停泵后，关闭（拧紧）清洗阀。4 .运行仪器。点击”Pumpmodu1.e”,设置流速1.Om1./min,设置流动相A:C=40:60（设置C通道为60%）,点击“马达”启动泵。点击“UV”，设置波长230nm,点击“笊灯”打开光源。5 .创建方法。在“创建”菜单中点击“仪器方法”，设定运行时间5min,在“诊断通道”项下点击“
3、取消选择所有通道”，点击下一步。pump常规设置按默认值，点击下一步。在pump流速梯度窗口，点击“删除平衡阶段”,设置流速为1.0m1.min,流动相A:C=40:60,点击下一步。SamPIer常规设置按默认值，点击下一步，进样模式按默认值，点击下一步。在温度控制窗口，不设直接点击下一步。在UV通道窗口，设置1通道波长为23Onm即可，点击下一步直至完成。点击左上角“保存”，将方法保存在ChromeIeon7下班级名称文件夹中，以组号及测定物质名称命名。6 .创建处理方法。在“创建”菜单中点击“处理方法”，选择基本定量，点击下一步，输入方法名称并保存至班级文件夹下，点击完成。7 .创建序列
4、。在“创建”菜单中点击“序列”，在进样名称的格式栏中输入样品名称（苯甲酸标准或果汁样品），样品数设2,进样次数设1，开始位置RA1.,进样量设20u1.,点击下一步。点击浏览,选择前面所建立的仪器方法和处理方法，用作新建样品序列的分析。点击下一步，输入序列名称并保存至班级文件夹下，点击完成。8 .测定。在自动进样器红色样品盘中的RA1.和RA2位置分别放入标准和样品溶液瓶。在左侧导航区下方点击仪器，点击工具栏的“监视基线”，在弹出的“选择监视通道”窗口勾选所需的监视波长和通道，待基线平稳后，点击“臼动校零”，点击工具栏的“停止”，停止基线采集。在左侧导航区下方点击数据（或选中新创建的序列,按照
5、实际放入样品盘的待测溶液修改样品名称和类型（1号为标准,2号为样品），点击“开始”，系统自动按顺序进样分析。如需添加样品，可点击“单击这里可添加新的进样”。9 .记录数据。在左侧导航区下方点击数据，打开刚运行的序列，双击序列数据表格第一列UV下方对应的色谱图，记录目标峰的保留时间和峰面积，如自动积分不正确，可利用手动积分删除峰，再进行手动积分处理。10 .关机。分析结束后，关紫外灯。如流动相中含有缓冲盐，则设置流动相甲醇:水=5:95,冲洗色谱柱30min,然后用100舟甲醇冲洗30mi11o停泵，关闭软件，从下到上依次关闭各单元电源，关闭计第机，填写仪器使用记录。二、日常维护保养1 .保持贮
6、液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗：用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。2 .使用HPIX试剂和新蒸二次蒸镭水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HP1.C级的试剂要进行过滤（HP1.C试剂出厂前已用0.02m滤膜过滤）。对流动相一定要脱气.3 .流动相使用不要超过两天，尤其是夏天，最好每天新鲜配制以免微生物的生长。腐蚀性溶剂或缓冲液在泵内存放不可过夜，否则溶剂会对泵起腐蚀作用。使用腐蚀性物质后要冲洗，先用水后用甲醇。4 .每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。5 .珍惜
7、保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱乐大的波动。6 .采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰形变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。7 .避免超负荷进样，对250X4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100Uge在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HP1.C柱性能持久良好的重要举措之一。8 .经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇一二氯甲烷（1：1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗,时间
8、均不少于1.h。9 .做完试验，及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀，尤其是对过夜的柱子和进样阀，一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液,再用甲醇或乙腊冲洗，并保存在乙腊（或甲醇）中。正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。含盐流动相的冲洗方法：每天操作结束后，先用纯化水或含甲醇5%的水冲洗时间约2030分钟，再用纯甲醉冲洗约3060分钟（注：不能直接用有机溶液冲洗，盐类易析出，堵塞色谱柱，造成色谱柱永久性损坏；所用水最好是重蒸谭的水，必须抽滤和脱气）。不含盐的流动相冲洗方法：每天操作结束后，先用流动相冲洗约10-15分钟，再用含5%甲醇的水冲洗10-20分钟，最后用纯甲醉冲洗，时间约2030分
9、钟（注：不能直接用纯水冲洗，易造成流动停止）。10 .以硅胶为基质的柱子，如C78、C-8等，要控制好流动相的PH值，一般不要低于2.5,不高于7.0。pH8会使硅胶骨架溶解：PHV2则键合相化学键易剥离。11 .尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。12 .用HP1.C分析酸碱性物质，由于吸附作用（次级保留）使峰形拖尾。加入改良剂可以大大改善峰形，提高积分的准确度。一般规则是：分析酸性物质，可加入1%有醋酸；分析碱性物质，可加入10-2On1.mOi/1.三乙胺；酸碱物质混为一体，可同时加入1%的醋酸和10-20Inn1.o1./1.三乙胺。
