常用微生物染色方法.ppt
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1、常用微生物染色方法常用微生物染色方法1、革兰染色2、抗酸染色3、墨汁染色革兰氏染色革兰氏染色原理革兰氏染色原理一 通透性学说二 等电点学说三 化学学说 G- / G+ 细菌细胞壁比较示意图细菌细胞壁比较示意图肽聚糖层肽聚糖层磷脂层磷脂层LPS磷壁酸磷壁酸 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌细胞壁细胞壁结构比较结构比较致密,肽聚糖层很厚,脂类含量致密,肽聚糖层很厚,脂类含量较少,酒精不易渗入,而且较少,酒精不易渗入,而且95酒精可使细胞壁脱水,间隙变小,酒精可使细胞壁脱水,间隙变小,通透性降低,阻碍通透性降低,阻碍结晶紫结晶紫-碘碘复合复合物渗出;物渗出; 革兰氏阴性菌细胞壁结构比较革兰氏阴性菌细胞壁结构
2、比较疏松,肽聚糖层很薄,外膜、脂疏松,肽聚糖层很薄,外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量蛋白、脂多糖均含有大量脂质脂质,易被酒精溶解,致使细胞壁通透易被酒精溶解,致使细胞壁通透性增高,细胞内的结晶紫性增高,细胞内的结晶紫-碘复合碘复合物被酒精溶解洗出而脱色。物被酒精溶解洗出而脱色。 原理原理二 等电点学说三 化学学说 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌等电点等电点(pH 2-3)比革兰氏阴性菌等电点)比革兰氏阴性菌等电点(pH 4-5)低,加之媒染剂)低,加之媒染剂碘为弱氧化剂能降低革兰氏碘为弱氧化剂能降低革兰氏阳性菌的等电点,因此在同阳性菌的等电点,因此在同样的样的pH的染色环境中,阳性的染色环境中,阳性菌
3、所带菌所带负电荷负电荷比阴性菌多,比阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料能与带正电荷的结晶紫染料能牢固结合,不易被酒精脱色。牢固结合,不易被酒精脱色。 原理原理一 通透性学说三 化学学说 革兰氏阳性菌含有大量革兰氏阳性菌含有大量核糖核糖核酸镁盐核酸镁盐,其可与,其可与结晶紫结晶紫-碘碘结合成大分子复合物,因而结合成大分子复合物,因而不易被不易被95酒精脱色;而阴酒精脱色;而阴性菌中此物质含量较少,因性菌中此物质含量较少,因而吸附染料量很少,分子量而吸附染料量很少,分子量也较小,故易被酒精脱色。也较小,故易被酒精脱色。 原理原理一 通透性学说二 等电点学说三三 化学学说化学学说 细菌涂片的制备细菌涂
4、片的制备涂片涂片:取一张洁净载玻片,用已灭菌的接种环取一环:取一张洁净载玻片,用已灭菌的接种环取一环生理盐水于玻片中央,再将接种环灭菌,生理盐水于玻片中央,再将接种环灭菌,取菌与生理取菌与生理盐水磨匀盐水磨匀,涂布成,涂布成1cm1cm1cm1cm大小区域的均匀薄膜,使大小区域的均匀薄膜,使盐水磨成灰白色为宜,接种环灭菌后放回试管架。盐水磨成灰白色为宜,接种环灭菌后放回试管架。干燥干燥:涂片最好在室温下自然干燥或将标本片涂抹面:涂片最好在室温下自然干燥或将标本片涂抹面向上,置酒精灯火焰上半尺高处向上,置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干慢慢烘干。固定固定:常用火焰加热法,手执载玻片一端,标本面向:常
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