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1、弥散性血管内凝血实验室诊断弥散性血管内凝血实验室诊断 弥散性血管内凝血（弥散性血管内凝血（DIC）是一种是一种在多种较严重疾病基础上发生的临床综在多种较严重疾病基础上发生的临床综合征。以弥散性毛细血管微血栓形成及合征。以弥散性毛细血管微血栓形成及继发性纤维蛋白溶解亢进为主要病理变继发性纤维蛋白溶解亢进为主要病理变化。广泛出血、微循环衰竭及多脏器功化。广泛出血、微循环衰竭及多脏器功能不全为临床特征。能不全为临床特征。 DIC改变几乎涉及到临床每一个专科，严改变几乎涉及到临床每一个专科，严重危及患者的生命。因此近数十年来国内外学重危及患者的生命。因此近数十年来国内外学者对于本病患者的血管、血小板、
2、凝血及纤溶者对于本病患者的血管、血小板、凝血及纤溶功能进行了广泛、深入的研究，并在本症的诊功能进行了广泛、深入的研究，并在本症的诊断与防治方面取得了较大进展。目前有关断与防治方面取得了较大进展。目前有关DIC诊断的实验室检测甚多，但存在不少问题，如诊断的实验室检测甚多，但存在不少问题，如部分特异性强、敏感度高的实验其不能及时提部分特异性强、敏感度高的实验其不能及时提供为临床结果而且价格昂贵，反之则特异性、供为临床结果而且价格昂贵，反之则特异性、敏感性较差。敏感性较差。 一、一、DICDIC常用检测方法常用检测方法( (一）一）2PT1血小板计数血小板计数3APTT5D-D4FbgDIC常用检测
3、方法（二）常用检测方法（二）6. TT8. AT:A 9. 3P 7. ：C6. 凝血酶时间（凝血酶时间（TT）测定）测定 原理原理 在血浆中加入在血浆中加入“标准化标准化”的凝血的凝血酶溶液后，血浆凝固所需的时间。酶溶液后，血浆凝固所需的时间。 材料材料 0.13mol/L枸橼酸钠溶液；凝血酶溶枸橼酸钠溶液；凝血酶溶液；正常血浆；水浴箱、秒表等。液；正常血浆；水浴箱、秒表等。 操作操作 血浆血浆0.1ml于试管中、于试管中、37水浴，水浴，加加0.1ml “标准化标准化”的凝血酶溶液，计的凝血酶溶液，计时。连续测定两次或三次取平均值时。连续测定两次或三次取平均值。 注意事项注意事项 稀释凝血
4、酶溶液稀释凝血酶溶液4可保存可保存3天；血浆室温下天；血浆室温下3h；不宜；不宜EDTA和肝素和肝素抗凝；终点判断：出现混浊的初期凝固抗凝；终点判断：出现混浊的初期凝固为准。为准。 参考值参考值 1618秒，受检者超过对照秒，受检者超过对照3秒以上为异常。秒以上为异常。 临床意义临床意义 TT延长多见于肝素增多或类延长多见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在，如系统性红斑狼疮、肝素抗凝物质存在，如系统性红斑狼疮、肝病或肾病等；低（无）纤维蛋白原血肝病或肾病等；低（无）纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血症；症，异常纤维蛋白原血症；FDP增多等。增多等。 评价评价 过高、过低过高、过低Fg可影响结果；过多
5、可影响结果；过多FDP和类肝素造成和类肝素造成TT延长，可用鱼精蛋延长，可用鱼精蛋白或蛇毒时间测定纠正及鉴别；白或蛇毒时间测定纠正及鉴别；TT可作可作为临床尿激酶等溶栓及肝素等抗凝治疗为临床尿激酶等溶栓及肝素等抗凝治疗的监护指标。的监护指标。7 7 血浆因子血浆因子促凝活性检测促凝活性检测原理原理 在缺乏因子在缺乏因子的血浆中，加入正的血浆中，加入正常血浆或病人的受检血浆，观察常血浆或病人的受检血浆，观察APTT的的结果值，依据实验室制定的标准曲线，结果值，依据实验室制定的标准曲线，可以计算出病人受检血浆中凝血因子的可以计算出病人受检血浆中凝血因子的含量。含量。 材料材料 乏因子乏因子基质、基
6、质、APTT试剂、缓试剂、缓冲液、正常血浆、水浴箱、秒表等。冲液、正常血浆、水浴箱、秒表等。 操作操作（一期法）（一期法） 将乏因子基质血浆与经过倍比稀释成不同将乏因子基质血浆与经过倍比稀释成不同浓度的已知因子浓度的已知因子含量的标准血浆混合后测定含量的标准血浆混合后测定APTT，绘制标准曲线；测定患者血浆同乏因子，绘制标准曲线；测定患者血浆同乏因子基质血浆混合后的基质血浆混合后的APTT，通过曲线查结果。，通过曲线查结果。 注意事项注意事项 乏因子基质血浆活性乏因子基质血浆活性30人。人。 参考值参考值 79%-128% 临床意义临床意义 血浆中凝血因子血浆中凝血因子活性增活性增高，主要见于
7、血栓前和血栓状态。高，主要见于血栓前和血栓状态。 减低多见于血友病患者，对于诊断减低多见于血友病患者，对于诊断轻型血友病和血管性血友病以及判断血轻型血友病和血管性血友病以及判断血友病携带者有一定的意义。因子友病携带者有一定的意义。因子:C水水平减低也是协助诊断肝病伴发平减低也是协助诊断肝病伴发DIC者的重者的重要诊断指标（因子要诊断指标（因子：C活性活性50%）。）。 评价评价 1. 急性期反应中可明显升高；急性期反应中可明显升高； 2. 降低时需与降低时需与VWF含量测定同时进行；含量测定同时进行； 3. 单纯单纯APTT延长时检测。延长时检测。 4. 受检标本可用缓冲液另行稀释。受检标本可
8、用缓冲液另行稀释。8 8抗凝血酶活性（抗凝血酶活性（AT:AAT:A）检测）检测 原理原理 发色底物法发色底物法 在待测血浆中加入过量的凝血酶，在待测血浆中加入过量的凝血酶，凝血酶与血浆中的凝血酶与血浆中的AT形成形成1：1的复合物，的复合物，剩余的凝血酶作用于显色肽，裂解出显剩余的凝血酶作用于显色肽，裂解出显色基因对硝基苯胺（色基因对硝基苯胺（PNA），显色程度），显色程度与剩余凝血酶的量呈正相关，而与血浆与剩余凝血酶的量呈正相关，而与血浆AT：A呈负相关。呈负相关。 材料材料 缓冲液、凝血酶、发色底物、缓冲液、凝血酶、发色底物、标准血浆、终止液。标准血浆、终止液。 操作操作 制备标准曲线：
9、稀释标准血浆加制备标准曲线：稀释标准血浆加入酶标板；同时稀释待测血浆；加入过入酶标板；同时稀释待测血浆；加入过量凝血酶；混匀，量凝血酶；混匀，37湿盒湿盒30min；加；加入发色底物，混匀入发色底物，混匀3min后加终止液；酶后加终止液；酶标仪测定数据。标仪测定数据。 注意事项注意事项 不能用肝素抗凝；标本不能不能用肝素抗凝；标本不能反复冻融，检测前应快速解冻；每次检反复冻融，检测前应快速解冻；每次检测均需做标准曲线。测均需做标准曲线。 参考值参考值 108.5%5.3。 临床意义临床意义 AT水平降低：遗传性水平降低：遗传性AT缺乏是一种常染缺乏是一种常染色体显性遗传性疾病，患者常在手术、创
10、伤、色体显性遗传性疾病，患者常在手术、创伤、感染、妊娠或产后发生静脉通栓，并可在多处感染、妊娠或产后发生静脉通栓，并可在多处反复发生血栓；获得性反复发生血栓；获得性AT缺乏分为三个方面：缺乏分为三个方面：AT合成降低（主要见于肝硬化、重症肝炎、肝合成降低（主要见于肝硬化、重症肝炎、肝癌晚期）；癌晚期）；AT丢失增加（见于肾病综合征）；丢失增加（见于肾病综合征）； AT消耗增加见于前血栓状态和血栓性疾病，如消耗增加见于前血栓状态和血栓性疾病，如心绞痛、心肌梗死、脑血管疾病、弥散性血管心绞痛、心肌梗死、脑血管疾病、弥散性血管内凝血、外科手术后等）。内凝血、外科手术后等）。 AT水平增高：见于血友病
11、水平增高：见于血友病A和血友病和血友病B、口服抗凝药物、使用黄体酮类药等。口服抗凝药物、使用黄体酮类药等。 评价评价 AT水平下降是高凝状态较好指标；水平下降是高凝状态较好指标；对疑难对疑难DIC具有诊断价值，急性白血病时具有诊断价值，急性白血病时DIC的危险信号；抗凝治疗中可对肝素治的危险信号；抗凝治疗中可对肝素治疗进行监测。疗进行监测。9 9 血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）试验） 原理原理 在凝血酶作用下，纤维蛋白原释在凝血酶作用下，纤维蛋白原释出纤维蛋白肽出纤维蛋白肽A、B后，转变为纤维蛋白后，转变为纤维蛋白单体（单体（FM）；纤维蛋白在纤溶酶降解下）
12、；纤维蛋白在纤溶酶降解下产生（产生（FDP）。）。FM与与FDP形成可溶性纤形成可溶性纤维蛋白单体复合物（维蛋白单体复合物（SPMC）。硫酸鱼精）。硫酸鱼精蛋白可使该复合物中蛋白可使该复合物中FM游离，然后又自游离，然后又自行聚合呈肉眼可见的纤维状、絮状，反映行聚合呈肉眼可见的纤维状、絮状，反映FDP尤其碎片尤其碎片X的存在。的存在。 材料材料 10g/L硫酸鱼精蛋白、阳性对照硫酸鱼精蛋白、阳性对照血浆、水浴等。血浆、水浴等。 操作操作 贫血小板贫血小板0.5ml于试管中于试管中37水浴水浴3min；加硫酸鱼精蛋白溶液；加硫酸鱼精蛋白溶液0.05ml混匀，混匀，3715min，立即观察结果。，
13、立即观察结果。 注意事项注意事项 1.本试验需用枸橼酸钠抗凝，不能用草酸盐、本试验需用枸橼酸钠抗凝，不能用草酸盐、肝素或肝素或EDTA盐等做抗凝剂。盐等做抗凝剂。 2.抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存于冰抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存于冰箱、到时未立即观察结果等，均会导致假阴性箱、到时未立即观察结果等，均会导致假阴性结果。结果。 3.若水浴温度太低或纤维蛋白原的含量过低，若水浴温度太低或纤维蛋白原的含量过低，都会造成假阴性结果。都会造成假阴性结果。 参考值参考值 正常人正常人3P试验阴性。试验阴性。 临床意义临床意义 阳性见于阳性见于DIC的早期或中期；但的早期或中期；但本试验假阳性常见于大
14、出血（创伤、手术、咯本试验假阳性常见于大出血（创伤、手术、咯血、呕血）和样品置冰箱后测定等。阴性见于血、呕血）和样品置冰箱后测定等。阴性见于正常人、正常人、DIC晚期和原发性纤溶症。如用连续晚期和原发性纤溶症。如用连续稀释硫酸鱼精蛋白副凝固试验（稀释硫酸鱼精蛋白副凝固试验（SDPST），），其结果较其结果较3P试验敏感。试验敏感。 评价评价 方法简便，灵敏度较高，费用低，为方法简便，灵敏度较高，费用低，为早年临床诊断早年临床诊断DIC常用的确诊试验之一；但由常用的确诊试验之一；但由于于Fg含量过低易导致含量过低易导致3P假阴性等因素，目前假阴性等因素，目前可以可以D二聚体代替。二聚体代替。 二
15、、分子标志物的检测及在二、分子标志物的检测及在DICDIC诊断中的意义诊断中的意义 血栓与止血分子标志物检测方法近血栓与止血分子标志物检测方法近1010余年来发展很快，其内容与方法颇多，余年来发展很快，其内容与方法颇多，且具有特异性强、敏感性高的特点，在且具有特异性强、敏感性高的特点，在研究血栓与止血性疾病与临床各类疾病研究血栓与止血性疾病与临床各类疾病特别是临床各类疾病引起的特别是临床各类疾病引起的DICDIC或前或前DIC(Pre-DIC)DIC(Pre-DIC)状态的发病机制，诊断和状态的发病机制，诊断和防治方面有重要价值，现将较为常用的防治方面有重要价值，现将较为常用的方法介绍如下：方
16、法介绍如下：（一）内皮细胞受损标志物检测（一）内皮细胞受损标志物检测1、内皮素、内皮素(ET-1)检测：检测：临床意义：内皮素是迄今为止最强的收缩临床意义：内皮素是迄今为止最强的收缩血管物质，血管物质， 其在血浆中水平增高，反其在血浆中水平增高，反映血管内皮损伤。映血管内皮损伤。正常参考值：正常参考值：50.87.58pg/ml (放射免疫放射免疫法法) )2、凝血酶调节蛋白（凝血酶调节蛋白（TM）测定：）测定： 临床意义：临床意义：TM是血管损伤的分子标志物。是血管损伤的分子标志物。资料显示：资料显示：90以上以上DIC患者患者TM升高。升高。正常参考值：正常参考值：2035g/L(放射免疫法放射免疫法) )。（二）血小板激活分子标志物检测（二）血小板激活分子标志物检测1、 血小板血小板颗粒释放物质的测定颗粒释放物质的测定 临床意义：血小板临床意义：血小板-TG及及PF4活性增高主要见于活性增高主要见于各类引起血小板过度激活及消耗性疾病如各类引起血小板过度激活及消耗性疾病如DIC时。时。正常参考值：正常参考值：-TG 25.33g/L， PF4 3.20.8g/L2、 血小板膜及血浆
