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1、微生物实验室质量控制 微生物实验室存在的主要问题微生物实验室存在的主要问题u微生物检验人员配备不足；硬件较好，软实力较差u送检率不高，标本合格率低u对特殊耐药表型关注度不够，不能及时复核u仪器药敏折点不能及时更新，药敏方法单一u微生物LIS系统建设存在缺陷；专业人员较少使WHONET软件统计数据；u与临床沟通较差，较少参与临床会诊； 临床医生对微生物检验认识不足，缺乏信任；质量控制是准确检验结果的保证全面质量控制全面质量控制： 检验前检验前 检检验中验中 检检验后验后检验前程序申请单申请单u应包括标本来源和诊断u感染类型和/或目标微生物u宜提供抗菌药物使用信息微生物采集及运送指南微生物采集及运
2、送指南应包括：微生物采集及运送指南应包括：不同部位采集方法例如血培养：消毒技术、合适标本量、诊断成人不明原因发热、血流细菌感染宜不同部位2套、每套2瓶（需、厌氧各一瓶）检验前- - 不合格标本u检验单与标本容器上的信息不符：如姓名不符、标本种类不符、检测目的不符等；u痰、环境样本、皮肤、中段尿 等样本申请厌氧培养；u 未用无菌容器；u标本量太少；检验前程序n标本接收u制定接收标准（如：肉眼可见渗漏，标本类/量，正确保存，预防拭子干燥，合适运送培基等）u评估合格性，反馈结果n不合格痰处理尽快通知医护（病房），及时通知患者（门诊）以便重新采集。检验中质量保证u 人员u 试剂u 培养基u 设备u 检
3、验过程： 方法的确认 SOP 生物参考区间 测量准确性 内部质量控制体系 标本质量评估人员基本要求u上岗前辨色力u相关教育背景u专业技术及知识培训（至少每年一次）u熟悉微生物SOP、消毒灭菌、生物安全u人员数量满足服务要求临床微生物学实验室建设基本要求专家共识要求三级医院微生物室至少有固定人员68人，建议10人以上；二级医院微生物室至少有固定人员23人，建议5人以上。临床微生物学实验室建设基本要求专家共识三级医院微生物室面积不低于160m 2 ，二级医院不低于60m 2 。人员的培训及考核n 培训：u 制定各级人员计划；u 内容：质量保证及管理，专业知识， 生物安全、检验活动涉及的所有文件n考
4、核：能力评估u 新入职人员：最初6个月应进行至少2次能力评估；u 每人每6个月岗位胜任考核，未通过者再培训再考核；u 当职责变更时，或离职6个月以上再上岗时，应再培训考核；u 政策、技术、程序有变更时，应再培训考核u 人员比对：显微镜检查、分离鉴定、药敏、实验结果判断、报告等内容的一致性质控菌株u微生物室检验人员正确保管、使用菌株，并确保实验室生物安全。u 所有菌株应由微生物主管及其委派责任人保管，采取双人双锁保管制度。u来源： ATCC标准菌株、CAP质控菌株、卫生部临检中心质控菌株、山东省临床检验中心质控菌株质控菌株使用u复苏：标准菌株送到实验室后，应严格按照说明书操作。u 保存：将标准菌
5、株以无菌技术接种于菌株保存管中，置-70低温冰箱保存。u标准菌株复苏后，传代最多不得超过5代，如超过5代将不再作为标准菌株使用。u标准菌株保存管一经解冻使用后，不得再次冻存。u每年取出1支菌株保存管，接种相应平板，培养1824h获得纯菌落。再挑取纯菌落接种于20支菌株保存管，置于70低温冰箱保存。这20支菌株保存管可每月取出1支供临床使用。u每月使用时，须从-70低温冰箱中拿出每月使用的菌株保存管， 接种平板，孵育培养获得纯菌落。平板上生长的纯菌落可以在2-8冰箱中保存一个月用以当月的质控菌株传代。质控菌株种类u鉴定用质控菌株u培养基用质控菌株u药敏试验用质控菌株u染色试验用质控菌株质控菌株n
6、标准菌株（药敏用）u 种类及数量满足工作要求u 记录来源，传代u 菌株性能证明满足要求的证据及记录l ATCC25922, 25923，27853, 29212，29213等。l 冷冻保存质控原代培养物, 28储存传代培养物l 每周制备新的传代培养物l 每月制备新的原代培养物试剂u包括染液（每周一次）、化学试剂、培养基、药敏纸片等u质量控制：直接分析质控物、新旧批号平行试验等。u质控频率：每一批号或每一货次常用试剂及生化反应培养基质量控制 试剂名称试剂名称阳性对照菌种阳性对照菌种阴性对照菌种阴性对照菌种杆菌肽A群链球菌B群链球菌Optochin纸片肺炎链球菌草绿色溶血链球菌V因子嗜沫嗜血杆菌副
7、流感嗜血杆菌X因子副流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌V+X因子流感嗜血杆菌培养基（购买）u保存制造商提供的质量文件 标识明确 生产日期 保质期 其他信息（配方，质控，储存条件等）u外观良好、水分适宜、适当的颜色和厚度、无污染、无冷冻等。u 无菌试验、性能验证（生长试验、抑制试验、生化反应）、平行试验u启封后，改变了效期及储存条件，宜记录新有效期。储存条件依从厂商。商品化培养基的验收要点u外观 检查外观是否完好，有无裂开、溶血、冰冻、不均衡填充，过量气泡以及明显污染的情况。u标识 培养基上是否有明确标识，包括：培养基种类、生产日期（批号)、保质期、储存条件等。u 质量控制 外观无明显不合格的培养基要进行
8、质量控制实验，合格后方可使用。培养基（自制）u名称和类型u 分装体积u 存放条件：通常2-8冰箱保存1-2周u配制时间和配制人员u质量控制培养基配置注意要点质量控制u 无菌试验：将制好的培养基再35孵育过夜，判定是否灭菌合格，若发现有细菌生长，不能继续使用；u效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。培养基培养基质控菌株质控菌株预期结果预期结果血平板A群链球菌ATCC19615Spn ATCC49619Eco ATCC25922生长，溶血生长，溶血生长良好巧克力平板Hin ATCC49247Spn ATCC49619生长良好
9、生长良好含Van巧克力平板Hin ATCC49247Sau ATCC25923生长良好，菌落典型不生长麦康凯平板Eco ATCC25922鼠伤寒ATCC14028生长，红色菌落生长，无色透明菌落中国蓝平板Eco ATCC25922鼠伤寒ATCC14028生长，蓝色菌落生长，无色菌落SS平板Eco ATCC25922鼠伤寒ATCC14028部分抑制生长，红色菌落生长，无色透明菌落纸片扩散法药物敏感试验质量控制u频率u质控菌株u结果判读纸片扩散法操作规程培养基：MH (重复性好，低抑制剂，营养好)u 厚度：4mmu PH：7.27.4pH低时，氨基糖甙,大环内酯 pH高时，青霉素类的活性 u 若当
10、天不使用，储存于2-8C，七天内使用。药敏纸片药敏纸片u可靠供应商的纸片，纸片应同时至少有一个分析说明的纸片批号和浓度的证书，并能提供用推荐的质控细菌进行质控的数据。u 14C以下冷冻至使用前。内酰胺类应密封包装并冷冻，某些不稳定的药物（如IPM、头孢克罗、克拉维酸复合药）应冷冻保存直至使用。u装有纸片的容器应于使用前1-2小时移出冰箱，平衡至室温才能打开。以防止纸片上冷凝水产生。u当指示剂变色时，应更换干燥剂以防止过于潮湿。药敏试验失控的原因分析药敏试验失控的原因分析失控结果出现的原因可能包括但不限于：uQC菌株 QC菌株使用不正确 不合理储存 维护不足（例如，使用同一个培养物超过1个月）
11、污染无法生存 微生物内部发生的改变（如，突变，质粒丢失）u测试用品 不合理的储存或运输条件 污染 KB法中使用有缺陷的琼脂平板（过厚或过薄，PH过高或过低），MIC法中使用的管或孔中的肉汤量不足 使用损坏的平板（如有裂隙）、卡片、管 使用过期的材料u测试程序 没有正确使用孵育的温度或环境条件 没有正确地制备或者调整接种悬液 从孵育时间不正确的平板上制备接种物 从含有抗生素或其它生长抑制复合物的鉴别培养基或选择培养基中制备接种物 使用错误的纸片、辅助用品 纸片放置不当（例如，没有充分接触琼脂） 没有正确判读或解释实验结果 测量错误 录入错误u 仪器 功能不正常或超出校准范围（例如比浊仪、移液管、
12、游标卡尺等）检验程序检验程序u 应制定常规药敏试验方法（纸片扩散法、琼脂稀释法、微量肉汤稀释法、E 试验或其他）的操作程序（含各类病原体和/或标本的检测药物、质控标准、结果解释等）；u 抗菌药物敏感性试验方法包括纸片扩散法、稀释法（琼脂稀释法、肉汤稀释法）、浓度梯度扩散法（E 试验）或自动化仪器检测；u 抗菌药物敏感性试验方法及结果判断至少应遵循上一年的标准。检验后程序l结果报告应与检验的内容一致，如粪便沙门、志贺菌培养，报告“未检出沙门、志贺菌”。血培养阴性结果报告应注明培养时间。l当某些对患者处理具有重要意义的实验结果达到危急值时，立即通知临床医生或相关人员。危急值至少应包括血培养阳性结果
13、、脑脊液显微镜检查及培养阳性结果、国家规定立即上报的法定传染病等。l血液、脑脊液标本的培养鉴定应及时发送分级报告，如标本直接涂片或湿片直接镜检、培养皿的判读等。无菌部位来源标本宜报告直接涂片镜检的阳性结果。l应在收到标本24小时内报告分枝杆菌抗酸或荧光染色结果。l某种细菌耐药率异常增高或符合院感爆发的定义时应报告院感部门。l对药敏结果按规定进行审核。l应参加全国或地区耐药监测网。CLSI规定的药敏审核方案l确保药敏试验的结果和细菌鉴定的可重复性；l检查是否抄写错误，污染或使用了有缺陷的板条，平板或 药敏卡；l检查该患者以前的报告，以确定以往是否分离到同样的菌株，其结果是否确认过；l为确保试验重复性，使用与初次相同方法重复鉴定菌株和药敏试验。l在实验室内部或参比实验室用第二种方法确认菌株鉴定及药敏；临床微生物实验室信息系统LIS系统应用的意义：快速、准确、高效的与临床进行信息交流。有条件的实验室应建立信息化管理系统 ，应具备以下基本功能：l 信息系统涵盖整个检验流程 如：申请收费采样签收质控检测前处理检测过程检测后处理审核查询，统计等。l 强大的数据处理能力，能提供累计、定期总结报告。l 性能稳定，安全、保密性能好，维护和维修方便，拓展性强。l 能与自动化鉴定药敏设备、WHONET软件进行数据传输。质量是细菌耐药性监测的生命线！谢谢聆听！
