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1、羊嘟躅组培育苗技术规程1范围本文件规定了羊跳躅(RhododendronmolleG.Don)组培育苗技术中外植体制作、消毒灭菌、初代培养、分化培养、继代增殖培育、生根培养、炼苗移植、生产档案等技术要求。本文件适用于羊蹄躅组培育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该口期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。LY/T 2548-2015NY/T 2306-2013DB23/T258I-2020DB34/T 3719-2020DB53/T 909-2019羊那躅育苗技术规程花
2、卉种苗组培快繁技术规程XX杜鹃组培育苗技术规程染井吉野樱组培育苗技术规程高山杜鹃组培苗生产技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 羊梆躅Rhododendronmolle又名闹羊花、黄杜鹃，属杜鹃花科杜鹃花属羊跳躅亚属落叶灌木，微毒。花色黄色或金黄色，花期35月，具观赏及药用价值。3.2 组培苗plantlet利用植物组织、器官或细胞等作为起始材料，通过植物组织培养方式生产获得的植株。3.3 植物组培planttissueculture将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料，通过无菌操作接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株
3、的技术。4缩略语下列缩略语适用于本文件。4.1 WPMWoodyPlantMadium,木本植物培养基。4.2 IBAIndole-3-BUtytrieacid,口引噪丁酸。4.3 ZTZeatin,玉米素。4.4 NAAI-Naphthylaceticacid,-蔡乙酸。4.5 TDZThidiazuron,噫苯隆。4.6 ACCharcoal,活性炭粉。5组培苗培养5.1 种子收集9月12月，当黄果由青绿色转变为淡黄色或禾杆色时采集。箱果摊放在垫有牛皮纸的筛子或簸箕上，置于干燥通风处阴干装入纸袋中，存放在室内干燥处备用。5.2 消毒灭菌种子使用75%的酒精浸泡IOs,无菌水漂洗1次，用5%
4、次氯酸钠进消毒5min,2%氯化钙溶液清洗2次，无菌水清洗5次，备用。5.3 诱导发芽种子发芽培养基WPM+TDZ1.0mgL+NAA0.5mgL,o消毒后每瓶接种10粒种子。培养基附加60gL/X脂和30gLl蔗糖,调整PH值至5.45.6,培养温度为25土1,光照强度为150020001x,每日光照时数12h.6外植体预处理6.1 外植体制作叶片：选取生长健壮的羊跳躅无菌苗嫩叶，除叶稍和叶柄，并在叶片中部垂直于叶脉横切一刀，剪成边长大于0.5Cm的正方形，叶面朝上放置，备用。6.2 接种在超菌工作台上，将叶片正面朝上平放于培养基上，每瓶接种34个外植体，酒精灯快速灼烧瓶口一圈后密封，注明标
5、签。7组织培养7.1 培养条件培养基附加6.0gL-lX脂和30gL-l蔗糖，调整PH值至5.45.6,培养温度为25土1,光照强度为150020001x,每日光照时数12he7.2 初代培养初代培养基为WPM+TDZLOmgdJ+NAALOmglL叶片在培养基上长出大量淡黄色的椭圆形颗粒，诱导形成愈伤组织。7.3 分化培养继代培养基为WPM+ZT1.0mgL,+NAA0.5mgL,o将愈伤组织成小块放置培养基中，诱导分化长出健壮的健壮丛生芽。7.4 继代增殖培养增殖培养基为WPM+ZT1.5mgL,+NAA1.0mgLL丛生芽切割为0.5-l.Ocm的小块，转接至增殖培养基上，得到大量的丛生
6、芽。7.5 生根培养生根培养基为WPM+IBA0.5mgL,+AC30gLL将高度2cm以上的增殖苗切割成单株后转接至生根培养基。8炼苗8.1 生根瓶苗质量要求植株生长健壮，株高大于2.5cm,展叶数量大于3片，新根数量大于3条，可进行炼苗。8.2 炼苗方法培养瓶开盖后放置在有散射光的温室中培养35d,室温控制在（255）0Co9移栽9.1 栽培基质栽培基质为育苗基质，有机质N25%、腐殖酸8%、水分（游离水）32%PH值5.0-7.0。将基质铺满50孔穴盘，单孔口径4.8cm,深5.0cm。用75%可湿性多菌灵粉剂1000倍液喷淋灭菌后备用。9.2 洗苗取出己生根的组培苗，置于清水中洗净根部
7、培养基。9.3 移栽组培苗移栽至穴盘基质中，保持根系舒展，幼苗直立，基质覆盖住组培苗基部，稍压实。10苗期管理10.1 温度苗期温度控制在22-28之间，宜用遮光度50%的黑色遮阴网覆盖，避免阳光直射，并保持周边空气流通。10.2 湿度空气湿度控制在70-85%之间。第一片新叶完全展开时，逐步降低空气湿度，最终将空气湿度控制在50%左右。10.3 地栽标准幼苗生长健壮、株型饱满、具有完整发达的根系、苗高1525cm、叶片数6片以上，可进行地栽。11病虫害防治羊躅躅苗期常见病害有：叶斑病、茎腐病、白粉病、叶肿病；虫害包括：杜鹃冠网蜡、红蜘蛛、军配虫、玫斑金刚钻、木建蛾。防治方法参照LY/T2548-2015的技术执行。12生产档案应建立生产档案，内容包括：材料采集、培养基制备、外植体消毒、培养条件、炼苗移植及管理等。应保存技术档案，内容包括：具有保存价值的照片、文字、技术路线、实验设计与实验结果、病虫害调查与防治等。
