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1、 非发酵革兰阴性杆菌 定义v 非发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡非发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。致病菌。O-F试验发酵型（发酵型（F）氧化型氧化型(O)产碱型产碱型(-)非发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱非发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞
2、菌属等。属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。分类分群依据分群依据v氧化酶试验v葡萄糖氧化发酵试验v动力试验二、二、非发酵初步分群非发酵初步分群假单胞菌属v 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，DNA DNA G+CG+C为为585871mol71mol，包括，包括200200余种菌。多数为余种菌。多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。件致病菌。代表菌株为铜绿假单胞菌代表菌株为铜绿假单胞菌v 假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有假单
3、胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占7070 8080，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主菌、产碱假单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主要病原菌。要病原菌。临床意义临床意义微生物特性微生物特性 微生物检验微生物检验2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶氧化酶阳性，吲哚氧化酶阳性，吲哚、甲基红、甲基红、VP阴性阴性。微
4、生物检验微生物检验3.药敏试验A组：头孢他定、庆大霉素、美洛西林、替卡西林、哌拉西林头孢他定、庆大霉素、美洛西林、替卡西林、哌拉西林B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星妥布霉素、环丙沙星C组：头孢噻肟、氯霉素头孢噻肟、氯霉素U组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星、羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星、SMZ 铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播途径和污染，因此易感染播途径和污染，因此易感染,特别是免疫力低下特别是免疫力低下的患者。引起的患者。引起:1.
5、1.皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染染2.2.菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性3.3.感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以致引起角膜穿孔而失明。以致引起角膜穿孔而失明。临床意义临床意义生物学性状生物学性状v形态与染色形态与染色：G-G-杆菌，杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛、多形性，有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢荚膜，无芽孢,产荧光素和产荧光素和绿脓素绿脓素v培养特性：培养特性：专性需氧，专性需氧，44不生长不生长42 生长，在生长，在血平板上经血平板上经35353737，1818
6、24h24h培养可表现为：菌培养可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘落大而扁平、湿润、边缘不齐不齐,有金属光泽有金属光泽,有生姜有生姜样芳香气味样芳香气味,菌落周围有宽菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。大的兰绿色透明溶血环。生物学性状生物学性状v普通琼脂培养基上普通琼脂培养基上能产生水溶性绿色能产生水溶性绿色素，使整个培养基素，使整个培养基变为绿色。变为绿色。MACMAC培养培养基上，基上，18-24h18-24h可形可形成微小无光泽半透成微小无光泽半透明的菌落。明的菌落。SSSS平板平板上可行成类似沙门上可行成类似沙门菌的菌落。菌的菌落。生物学性状生物学性状v生化反应：生化反应：氧化酶阳性，触
7、酶阳性，氧化酶阳性，触酶阳性，O/FO/F氧氧化型，精双（化型，精双（+）还原硝酸盐。）还原硝酸盐。v抗原构造和分型：抗原构造和分型：菌体菌体O,O,鞭毛鞭毛H,H,粘液粘液S S和菌和菌毛抗原。毛抗原。v抵抗力抵抗力:耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消毒剂，临床分离的菌株多耐药。毒剂，临床分离的菌株多耐药。铜绿假单胞菌检验铜绿假单胞菌检验 v1标本采集标本采集 按疾病和检查目的，分别采按疾病和检查目的，分别采 取不同的标本：患取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸者的血液、脑脊液、胸(腹腹)水、脓液、分泌液、痰、水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等；
8、医院病区或手术尿液、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。用品。检验程序检验程序检验方法检验方法v直接镜检：直接镜检：G-杆菌杆菌v分离培养分离培养：在普通培养基生长良好，在普通培养基生长良好，经经181824h24h形成圆形、扁平隆起、湿润菌落。形成圆形、扁平隆起、湿润菌落。琼脂被染成绿色或黄绿色，约琼脂被染成绿色或黄绿色，约8080-90-90产生绿脓素或荧光素。在血平板上表现为：产生绿脓素或荧光素。在血平板上表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐；有金属菌落大而扁平、湿润、边缘不齐；有金属光泽；有
9、生姜样芳香气味；菌落周围有宽光泽；有生姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。大的兰绿色透明溶血环。检验方法检验方法v鉴定鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，氧化酶阳性，触酶阳性，O-FO-F试试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。v 铜绿假单胞菌快速鉴定要点：铜绿假单胞菌快速鉴定要点：检验结果分析与报告检验结果分析与报告。嗜麦芽窄食单胞菌分分 类类v 分类曾经过两次反复分类曾经过两次反复，最终定为假单胞菌属。，最终定为假单胞菌属。
10、临床意义v分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染，下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染，严重者可出现菌血症和心内膜炎。严重者可出现菌血症和心内膜炎。假单胞菌的感染中居第二位，非发酵菌所致假单胞菌的感染中居第二位，非发酵菌所致的感染中居第三位。的感染中居第三位。微生物特性vG-杆菌，具有端鞭毛杆菌，具有端鞭毛1-8根，有动力，无芽孢根，有动力，无芽孢无荚膜。无荚膜。微生物检验v标本采集：血液标本先增菌标本采集：血液标本先增菌后分离培养，其他标本直接后分离培养，其他标本直接接种。接种。v分离培养：营养需求不高，分离培养：
11、营养需求不高，在血平板和普通琼脂平板上在血平板和普通琼脂平板上生长良好，经生长良好，经35培养培养18-24h后可形成中等大小、圆后可形成中等大小、圆形、光滑、湿润、不溶血的形、光滑、湿润、不溶血的菌落，并可产黄色色素。菌落，并可产黄色色素。4不生长，不生长，42 近半数生近半数生长。并在长。并在MAC平板上生长良平板上生长良好。好。微生物检验v鉴定：氧化酶（鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（），明胶液化试验（+），），七叶苷（七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（），赖氨酸脱羧酶（+），），氧化分解葡萄糖。氧化分解葡萄糖。药敏试验v含含 内酰胺酶。内酰胺酶。v 临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素。临床
12、治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素。v 对亚胺培南天然耐药对亚胺培南天然耐药v 不用不用K-b法做药敏试验。法做药敏试验。嗜麦芽窄食单胞菌初步鉴定要点v在血平板和在血平板和MAC上生长良好上生长良好v氧化酶（氧化酶（-）v OF试验氧化型试验氧化型v 赖氨酸脱羧酶阴性赖氨酸脱羧酶阴性v 可产黄色色素可产黄色色素v 抗生素的敏感方式抗生素的敏感方式 不动杆菌属分 类v定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的能运动的G-杆菌。杆菌。v属奈瑟菌科属奈瑟菌科v 17个杂交群个杂交群v 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发酵
13、菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。临床意义v分布广泛分布广泛v 条件致病菌条件致病菌v 医院感染的常见病原菌医院感染的常见病原菌微生物特性vG-球杆菌，常成对排列，也可单个存球杆菌，常成对排列，也可单个存在。无芽孢，无鞭毛，粘液型菌株有在。无芽孢，无鞭毛，粘液型菌株有荚膜。荚膜。v营养要求一般，在普通琼脂平板和营养要求一般，在普通琼脂平板和MAC平板上均能生长。平板上均能生长。SS平板上部平板上部分菌株可生长。分菌株可生长。微生物检验v检验程序：微生物检验v标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接接种血平板和麦康凯平板，含菌量
14、较少的标接种血平板和麦康凯平板，含菌量较少的标本需增菌后再培养。本需增菌后再培养。v直接镜检：标本经革兰染色后镜检可见直接镜检：标本经革兰染色后镜检可见G-球球杆菌常成双排列，并可见白细胞吞噬现象。杆菌常成双排列，并可见白细胞吞噬现象。v 抗原检测和分型：抗原检测和分型：微生物检验v分离培养：血平板形成圆形、灰白分离培养：血平板形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径色、光滑、边缘整齐、直径2-3mm的菌落。洛菲不动杆菌菌落的菌落。洛菲不动杆菌菌落小，小，1-1.5mm。溶血不动杆菌可出。溶血不动杆菌可出现现 溶血。溶血。MAC平板生长良好，鲍平板生长良好，鲍曼不动杆菌可呈轻微红色。曼不动杆菌可
15、呈轻微红色。v鉴定：氧化酶（鉴定：氧化酶（-）、动力（）、动力（-）、）、硝还（硝还（+）药敏试验和结果解释v 可采用可采用K-B法药敏试验法药敏试验v 鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。鲍曼不动杆菌初步鉴定要点vOF试验：试验：O/-vMAC 上生长良好，菌落呈轻微粉红色上生长良好，菌落呈轻微粉红色v 氧化酶（氧化酶（-）v快速分解葡萄糖和乳糖快速分解葡萄糖和乳糖v 无动力无动力v 对青霉素耐药对青霉素耐药产碱杆菌属产碱杆菌属v1.1.与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产
16、碱与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产碱杆菌、木糖氧化产碱杆菌及亚种，杆菌、木糖氧化产碱杆菌及亚种，DNA G+C mol%DNA G+C mol%为为56567070，典型菌种为粪产碱杆菌。，典型菌种为粪产碱杆菌。v2.2.人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、尿液、血液及脑脊液中分离出来。尿液、血液及脑脊液中分离出来。产碱杆菌属产碱杆菌属v3.3.为为G-G-杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无荚膜。荚膜。v4.4.在普通培养基上在普通培养基上181824h24h形成无色透明菌形成无色透明菌落落 。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，O-FO-F试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。黄杆菌属黄杆菌属v1.1.为一群无动力和芽胞、氧化酶阳性的为一群无动力和芽胞、氧化酶阳性的G-G-杆菌。杆菌。与临床相关菌种有短黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆与临床相关菌种有短黄杆菌
