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1、实验一实验一 革兰染色法、细菌的特殊染色法革兰染色法、细菌的特殊染色法 实验目的实验目的 o 掌握细菌革兰染色的原理与方法掌握细菌革兰染色的原理与方法o 掌握细菌芽孢染色的基本原理与方法掌握细菌芽孢染色的基本原理与方法o 熟悉普通光学显微镜的油镜使用与保养熟悉普通光学显微镜的油镜使用与保养 实验原理实验原理 o 革兰染色法的简介革兰染色法的简介o 革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。由丹麦医师别染色法。由丹麦医师Christian GramChristian Gram创立。创立。o 方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂方法是先将细菌用结晶紫染色
2、，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（乙醇和丙酮）脱色，再用复染剂染色。（乙醇和丙酮）脱色，再用复染剂染色。实验原理实验原理 o 革兰染色法的原理革兰染色法的原理o 一般认为革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量一般认为革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量高，且交联度大，脂类含量少，经高，且交联度大，脂类含量少，经95%95%乙醇脱色时，乙醇脱色时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，与细胞结合肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，与细胞结合的结晶紫与碘的复合物不容易被脱掉，因此细胞的结晶紫与碘的复合物不容易被脱掉，因此细胞仍保留初染时的颜色。而革兰阴性菌的细
3、胞壁较仍保留初染时的颜色。而革兰阴性菌的细胞壁较薄，脂类含量较高，肽聚糖含量较低，乙醇脱色薄，脂类含量较高，肽聚糖含量较低，乙醇脱色时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经复染之后，又染上了复染的颜色。色，经复染之后，又染上了复染的颜色。实验原理实验原理 o 芽孢染色法的原理芽孢染色法的原理o 芽孢具有厚而致密的壁，折光性强，通透性芽孢具有厚而致密的壁，折光性强，通透性低，不易着色，用一般染色法只能使菌体着低，不易着色，用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。芽
4、孢染色法都基于同一个色而芽孢不着色。芽孢染色法都基于同一个原则，即除了使用着色力强的染料外，还需原则，即除了使用着色力强的染料外，还需要加热或延长染色时间等，促进标本着色。要加热或延长染色时间等，促进标本着色。然后使菌体脱色而芽孢上的染料仍然保留。然后使菌体脱色而芽孢上的染料仍然保留。经复染之后，菌体和芽孢呈不同的颜色。经复染之后，菌体和芽孢呈不同的颜色。实验材料实验材料-菌株菌株 o 金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（209P209P）18-20h18-20h斜面斜面o 大肠杆菌大肠杆菌 18-20h18-20h斜面斜面o 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 20-24h20-24h斜面斜面实验材料实验
5、材料-试剂试剂 o 蒸馏水蒸馏水o 结晶紫结晶紫o 卢戈碘液卢戈碘液o 95%95%乙醇乙醇o 番红花红番红花红o 孔雀绿孔雀绿实验步骤实验步骤 o 革兰染色法革兰染色法o 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 初染（结晶紫初染（结晶紫1 1分钟）分钟）水洗水洗 媒染（碘液媒染（碘液1 1分钟内换分钟内换2-2-3 3次）次）水洗水洗 脱色（脱色（95%95%乙醇乙醇20-3020-30秒）秒）水洗水洗 复染（番红花红复染（番红花红5 5分钟）分钟）水水洗洗 吸水纸吸干吸水纸吸干 镜检镜检实验步骤实验步骤 o 芽孢染色法芽孢染色法o 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 初染（孔雀绿初染（孔雀绿2020分钟）分钟）水洗水洗 复染（番红花红复染（番红花红5 5分钟）分钟）水洗水洗 吸水纸吸干吸水纸吸干 镜检镜检实验结果实验结果 实验结果实验结果 其它项目其它项目 o 预习酵母菌和霉菌的形态观察预习酵母菌和霉菌的形态观察讨论讨论 o 革兰染色法中关键步骤是哪一步？为什么？革兰染色法中关键步骤是哪一步？为什么？o 为什么芽孢和菌体会被染成不同的颜色？为什么芽孢和菌体会被染成不同的颜色？
