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1、实验三实验三 氨基酸的纸色谱氨基酸的纸色谱【实验目的】【实验目的】1掌握纸色谱的操作方法。掌握纸色谱的操作方法。2了解纸色谱的基本原理。了解纸色谱的基本原理。【实验原理】【实验原理】色谱又可称层析，是一种分离混合物的物色谱又可称层析，是一种分离混合物的物理方法。其分离原理是混合物中各组分在两相理方法。其分离原理是混合物中各组分在两相之间溶解能力、吸附能力或其它亲和作用的差之间溶解能力、吸附能力或其它亲和作用的差别，使其在两相中分配系数不同，当两相做相别，使其在两相中分配系数不同，当两相做相对运动时，组分在两相间进行连续多次分配，对运动时，组分在两相间进行连续多次分配，使各组分达到彼此分离。其中
2、一相是不动的称使各组分达到彼此分离。其中一相是不动的称为固定相，另一相是携带混合物流过此固定相为固定相，另一相是携带混合物流过此固定相的流体称为流动相。的流体称为流动相。当流动相所含混合物经过固定相时，由于当流动相所含混合物经过固定相时，由于各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小、强弱也有差异，换言之，在相同作用的大小、强弱也有差异，换言之，在相同流动相下，不同组分在固定相中的滞留时间有流动相下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。这种借助在两相间分配差异而使混合物
3、中出。这种借助在两相间分配差异而使混合物中各组分分离的技术方法，称为各组分分离的技术方法，称为色谱法色谱法。纸色谱是以滤纸为载体，固定相是滤纸纤纸色谱是以滤纸为载体，固定相是滤纸纤维上吸附的水分；维上吸附的水分；流动相流动相(通常称为展开剂通常称为展开剂)一一般是指与水相混溶的有机溶剂，样品在固定相般是指与水相混溶的有机溶剂，样品在固定相水与流动相展开剂之间连续抽提，依靠溶质在水与流动相展开剂之间连续抽提，依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离的目的。两相间的分配系数不同而达到分离的目的。氨基酸是无色的化合物，可与茚三氨基酸是无色的化合物，可与茚三酮反应产生颜色，因此，溶剂自滤纸挥酮反应产生
4、颜色，因此，溶剂自滤纸挥发后，喷上茚三酮溶液后加热，可形成发后，喷上茚三酮溶液后加热，可形成色斑而确定其位置。色斑而确定其位置。【实验步骤】【实验步骤】1 1点样点样 取取16cm16cm6cm6cm的中速色谱滤纸在距离底边的中速色谱滤纸在距离底边2cm2cm处用铅笔划起始线，在起点线上分别点上处用铅笔划起始线，在起点线上分别点上标准品及混合样品溶液（样点间距标准品及混合样品溶液（样点间距1cm1cm），点），点样直径控制在样直径控制在2mm2mm4mm4mm，然后将其晾干或在红，然后将其晾干或在红外灯下烘干。外灯下烘干。2展开展开 向色谱缸中加向色谱缸中加25mL展开剂，盖上盖子约展开剂，盖
5、上盖子约5min（使缸内展开剂蒸气饱和），将点样后的（使缸内展开剂蒸气饱和），将点样后的滤纸悬挂在缸内（图滤纸悬挂在缸内（图4-2）使纸底边浸入展开）使纸底边浸入展开剂约剂约0.3cm0.5cm，待溶剂前沿展开到合适部，待溶剂前沿展开到合适部位（约位（约8cm10cm），取出，划出前沿线，），取出，划出前沿线，3 3显色显色 将展开完毕的滤纸，用电吹风吹干，使展将展开完毕的滤纸，用电吹风吹干，使展开剂挥发。然后，喷上开剂挥发。然后，喷上0.50.5的茚三酮溶液，的茚三酮溶液，再用电吹风热风吹干，即出现氨基酸的色斑。再用电吹风热风吹干，即出现氨基酸的色斑。4计算计算Rf值值 分别计算丙氨酸、亮氨
6、酸及未知溶液中各分别计算丙氨酸、亮氨酸及未知溶液中各成分的成分的Rf值。通常用相对比移值值。通常用相对比移值Rf表示物质相表示物质相对距离。对距离。Rf值的大小与物质结构、展开剂系统、值的大小与物质结构、展开剂系统、滤纸种类、温度、滤纸种类、温度、pH、时间等有关。在同样、时间等有关。在同样条件下，条件下，Rf值只与各物质的分配系数有关。因值只与各物质的分配系数有关。因此，用此，用Rf值来进行比较，就可以初步鉴定出混值来进行比较，就可以初步鉴定出混合样品中的不同物质。合样品中的不同物质。注意事项注意事项1.1.样点不能过大样点不能过大2.2.展开剂液面不能高于起始线展开剂液面不能高于起始线【思考题思考题】1 1纸色谱法所依据的原理是什么纸色谱法所依据的原理是什么?2 2纸色谱中，为什么样品点样处不能纸色谱中，为什么样品点样处不能 浸泡在展开剂中浸泡在展开剂中?3 3测定测定RfRf值的意义是什么值的意义是什么?4 4RfRf值常受哪些因素的影响值常受哪些因素的影响?
