脂多糖结合蛋白定量试剂盒说明书.docx

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1、脂多糖结合蛋白定址试剂盒说明书试验原理:ES试剂盒是固相夹心法溶联免疫吸附实验(ELISA).已知ES浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ES和生物索标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP.再经过温育和洗涤,去除未结合的酸结合物,然后加入底物A、B,和曲结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ES的浓度呈比例关系.特点:1、而效、灵敏、特异的抗体;2、稳定的重复性和可靠性;3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体:4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心2

2、0分钟左右(2000-3000转/分。仔细收集上消,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2 .血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠椽酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心.3 .尿液:用无菌管收集,尚心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次熟心。胸腹水、脑脊液参照实行。4 .细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上消。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度

3、达到100万左右“通过反匆冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份.离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心.5 .组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷冻保存备用。标本触化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心2。分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-2(C保存,但应避免反夏冻眼.试剂盒性能:1 .灵敝度:Z

4、Ui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2 .特异性:不与其它细胞因子反应。3 .全豆性:板内、板间变异系数均小于10%。操作步姿:1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用豆孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50Ul于反应孔内。3. 加入稀解好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板

5、,轻轻振荡混匀,37C温育1小时。4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。或复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次5. 每孔加入80Ul的亲和链梅素-HRP,轻轻振荡混匀,37C温白30分钟。6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重更此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37C温育10分钟.避免光照。8. 取出醉标板,迅速加入50Ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。9. 在45Onm波长处测定各孔的OD值。结果判断与分析:1、仪器值:丁波长45Onin的

6、商标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的ES标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的ES含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-240pgml操作注意事项:1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢匏到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质.3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用.保质前使用.4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器.5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6. 洗涤酣标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酬标反应孔中吸水。7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取0D8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样“9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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