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1、快速冰冻病理技术快速冰冻病理技术 概述概述 冰冻病理的目的冰冻病理的目的 冰冻切片制备冰冻切片制备 快速病理的注意事项快速病理的注意事项 术中快速病理诊断会诊意见及签发术中快速病理诊断会诊意见及签发 冷冻切片后剩余组织的处理冷冻切片后剩余组织的处理 资料管理资料管理 一、概述一、概述 冰冻病理冰冻病理是通过手术切取一小块活组是通过手术切取一小块活组织，通过特制的包埋剂，将组织冻结织，通过特制的包埋剂，将组织冻结于于-20度左右，切成薄片并染色，进行度左右，切成薄片并染色，进行镜下观察、诊断，以帮助临床医生确镜下观察、诊断，以帮助临床医生确定手术方案的一项技术。定手术方案的一项技术。是临床手术科
2、室与病理科的一种紧急是临床手术科室与病理科的一种紧急会诊。会诊。快速冰冻病理技术发展快速冰冻病理技术发展*18181818年由年由Pieter Pieter 首先创造发明的。首先创造发明的。*18911891年年HalstedHalsted和和AccartyAccarty将冰冻切片技将冰冻切片技 术列为正式诊断方法。术列为正式诊断方法。*19601960年年CryostatCryostat冰冻切片机正式应用于临冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高。床后，冰冻切片质量有了很大提高。目前目前,此项技术已普遍应用于临床，解此项技术已普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。决手术中的
3、病理诊断问题。随着冰冻切片技术和临床外科手术的发随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增展，要求做冰冻的病例逐年增多多。如：如：乳腺、甲状腺、卵巢等等。乳腺、甲状腺、卵巢等等。冰冻病理的目的冰冻病理的目的主要：1.确定病变的性质确定病变的性质 （炎症、肿瘤及其良恶性）；（炎症、肿瘤及其良恶性）；2.确定切除肿瘤的边缘有无癌组织残留确定切除肿瘤的边缘有无癌组织残留 以明确手术范围以明确手术范围。3.确认切除的组织确认切除的组织 例如甲状旁腺、输卵管及异位组织等。例如甲状旁腺、输卵管及异位组织等。4.确定切除的淋巴结有无转移及转移程度确定切除的淋巴结有无转移及转移程度。乳乳 腺
4、腺 纤纤 维维 腺腺 瘤瘤乳乳 腺腺 浸浸 润润 癌癌淋巴结转移癌淋巴结转移癌卵巢粘液性囊腺瘤卵巢粘液性囊腺瘤 （交界性）（交界性）卵巢粘液性囊腺瘤卵巢粘液性囊腺瘤二、准备工作二、准备工作1快速活检患方知情同意书快速活检患方知情同意书 相相关临床医师应向患者和（或）关临床医师应向患者和（或）患者授权人说明快速活检的意义和局患者授权人说明快速活检的意义和局限性限性，取得患者和（或）患方的同意，取得患者和（或）患方的同意，并在手术中快速活检患方知情同意并在手术中快速活检患方知情同意书上签字。书上签字。冰冻快速病理诊断知情同意书 术中冰冻快速病理学检查术中冰冻快速病理学检查是实施手术过程中是实施手术
5、过程中与手术方案相关的病理诊断手段，如与手术方案相关的病理诊断手段，如确定病变的确定病变的性质、病变扩散情况、性质、病变扩散情况、确定边缘确定边缘或或切端有无病变切端有无病变残留等，残留等，但因技术方法的限制，如时间短促、取但因技术方法的限制，如时间短促、取材有限等，存在一定的局限性和误诊的可能性材有限等，存在一定的局限性和误诊的可能性（通常是（通常是5%的误诊率）。某些病例难以快速做的误诊率）。某些病例难以快速做出明确诊断，需待常规石蜡切片进一步完成诊断，出明确诊断，需待常规石蜡切片进一步完成诊断，故向病人及家属说明。故向病人及家属说明。-科患者-（男/女，年龄-岁，住院号-）和家属已知晓上
6、述情况，同意手术中快速冰冻病理检查。签字人-与病人关系-身份证号-年 月 日2.2.向病理科递交快速活检申请单向病理科递交快速活检申请单临床手术医师应向病理科递交快速活检申请单临床手术医师应向病理科递交快速活检申请单 申请单需填写：申请单需填写：患者的病史，患者的病史，重要的影像学、重要的影像学、实验室检查结果和实验室检查结果和 提请病理医师特别关注的问题等。提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。3 3.手术中快速活检应手术中快速活检应由副主任医师以上由副主任医师以上的病理医师主持。的病理医师主持。尚不具备相应条件的病
7、理科不应勉强尚不具备相应条件的病理科不应勉强开展手术中快速活检业务。开展手术中快速活检业务。4 4负责快速活检的病理医师应了解患负责快速活检的病理医师应了解患者的者的：临床情况临床情况 手术所见手术所见 既往有关的病理学检查情况。既往有关的病理学检查情况。三、三、快速冰冻切片的制备快速冰冻切片的制备（一）（一）申请单和标本的验收、编号和申请单和标本的验收、编号和登记登记 手术中快速活体组织病理学检查申手术中快速活体组织病理学检查申请单和标本的验收、编号和登记参见普请单和标本的验收、编号和登记参见普通活体组织病理学检查常规。通活体组织病理学检查常规。时间的记录！时间的记录！（介绍附属医院情况）（
8、介绍附属医院情况）（二）标本的巨检、取材和（二）标本的巨检、取材和记录记录1.病理科验收快速活检申请单和标本后，病理科验收快速活检申请单和标本后，应参照普通活体组织病理学检查常规的应参照普通活体组织病理学检查常规的有关规定，立即进行标本的巨检、取材有关规定，立即进行标本的巨检、取材和记录。和记录。2.主持快速活检的病理医师应亲自参与标主持快速活检的病理医师应亲自参与标本的巨检和取材（或指导取材）。本的巨检和取材（或指导取材）。3.通常选取具有代表性病变组织通常选取具有代表性病变组织1或或2块，块，需要时，增加取材块数需要时，增加取材块数（三）组织切片的制备（三）组织切片的制备 冰冻切片的种类较
9、多，有低温恒冷箱冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法，半导体冰冻切片法循环制冷冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等。和氯乙烷冰冻切片法等。现在常用的是低温恒冷箱冰冻切片法。现在常用的是低温恒冷箱冰冻切片法。u 低温恒冷箱冷冻切片机低温恒冷箱冷冻切片机机箱面上有电子控制板，八个键：机箱面上有电子控制板，八个键：1.冷冻键和除霜键，冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，进行启动即时冷冻键，进行工作状态，可持续工作状态，可持续10mins。启动即时除霜。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜键，可将
10、工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，可持续除掉，可持续15mins。2.照明键，照明键，启动该键可照明工作间，有利工启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。作及观察组织的冰冻状况。3.消毒键消毒键，启动该键，可对工作间进行消毒。启动该键，可对工作间进行消毒。4.两两个快速自动进退键个快速自动进退键，两个，两个微小进退键微小进退键，一个一个手动旋钮手动旋钮，调节修组织块时的进退。，调节修组织块时的进退。冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60左右，中间为一台切片机，工作间的温度在左右，中间为一台切片机，工作间的温度在0-30之间。之间。低温恒冷箱冷冻切片机低温
11、恒冷箱冷冻切片机操操 作作 过过 程程1.取材，未固定的组织取材，不能太大、太取材，未固定的组织取材，不能太大、太厚厚，最好为，最好为24242mm。2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。滴上包埋剂。3.将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，将组织修平。将组织修平。4.调好切片厚度，一般在调
12、好切片厚度，一般在510um间。间。5.调好防卷板。切片时，切出的切片能在第一调好防卷板。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。取一载玻片，将其附贴上即可。6.6.应视不同的组织选择不同的冷冻度。应视不同的组织选择不同的冷冻度。1.切未经固定的脑组织、肝组织和淋巴结时切未经固定的脑组织、肝组织和淋巴结时，温度不能调太低，在温度不能调太低，在-10-15左右左右。2.切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调切甲状腺、脾、肾、肌肉等
13、组织时，可调在在-1520左右，左右，3.切带脂肪的组织时，应调至切带脂肪的组织时，应调至-25左右，切左右，切含大量的脂肪时，应调至含大量的脂肪时，应调至-30。u 冰冻切片的快速染色法冰冻切片的快速染色法 冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的恒冷箱中的固定液固定固定液固定1分钟分钟后即可染色。后即可染色。这样可以使切片中细胞内各种物质都这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，这在没有任何变化的情况下被固定起来，这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。明显，其他物质都完
14、好保存。染染 色色 方方 法法 取材取材 包埋、冰冻包埋、冰冻 切片切片 固定固定30秒秒1分钟分钟 水洗水洗 染苏木素染苏木素35分钟分钟 盐酸分化盐酸分化 氨水返蓝氨水返蓝20秒秒 伊红伊红1020秒秒 脱水脱水 透明透明 中性树胶封片中性树胶封片 u 快速冰冻切片制备流程快速冰冻切片制备流程取材取材包埋包埋冰冻冰冻切片切片固定固定脱水脱水染色染色水洗水洗透明透明封片封片1.完成冷冻完成冷冻HE染色切片制备的时间通染色切片制备的时间通 常为常为2025min。2.恒冷箱切片机制片：至少应于切片前恒冷箱切片机制片：至少应于切片前1h开机开机预冷，冷室温度一般为预冷，冷室温度一般为1520。3
15、.常规开展冷冻切片快速病理的病理科，恒冷常规开展冷冻切片快速病理的病理科，恒冷箱切片机宜处于箱切片机宜处于24h恒温待机状态。恒温待机状态。冰冻切片时的注意事项冰冻切片时的注意事项1.防卷板、切片刀和持刀架上的板块应保持防卷板、切片刀和持刀架上的板块应保持干净，因为这个地方是切片通过和附贴的干净，因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，将会破坏甚至撕裂切片，使使切片不能完整切片不能完整切出。切出。2.多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻
16、起来，放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。不费时也不会乱。3.放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，如果胡乱放置，就不能收到很好的效放置，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。果。4.4.临床快速冰冻切片，临床快速冰冻切片，不要预先固定不要预先固定！一是为了争取时间，二是固定了的组织，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。织中，形成了冰晶。5.当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片
