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1、（一）（一）无菌操作要求无菌操作要求（二）（二）无菌室使用要求无菌室使用要求（三）（三）消毒灭菌要求消毒灭菌要求 食品微生物检验室工作人员，食品微生物检验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：要求在无菌条件下进行，主要原因：1.1.接种时必须穿工作服、戴工作帽。接种时必须穿工作服、戴工作帽。2.2.进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间，工作帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间，工作前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用肥皂洗
2、手，然后用肥皂洗手，然后用75%75%酒精棉球将手擦干净。酒精棉球将手擦干净。3.3.进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%95%酒精点燃烧灼酒精点燃烧灼3 3次后使用。次后使用。4.4.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及 外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边。吸管尖不能触及试管或平皿边。5.5.接
3、种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。及打开试管塞都要通过火焰消毒。6.6.接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处。杆的连接处。7.7.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。头吸取，不得直接用口吸。无菌室通向外面的窗户应为双层玻无菌室通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并
4、璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有小窗，以备进入无推拉门，另设有小窗，以备进入无菌间后传递物品。菌间后传递物品。无菌室内应保持清洁，工作后用无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品。台面，不得存放与实验无关的物品。无菌室使用前后应将门关紧，打开紫无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需需30W30W紫外灯，距离在紫外灯，距离在1.0m1.0m处，照射时处，照射时间不少于间不少于3
5、0min30min，使用紫外灯，应注意，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。少紫外线穿透的影响。处理和接种食品标本时，进入无菌处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。递物品，可通过小窗传递。在无菌室内如需要安装空调时，则在无菌室内如需要安装空调时，则应有过滤装置。应有过滤装置。(三三)消毒灭菌要求消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器
6、皿、金属微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。物等，必须经灭菌后方能使用。1 1干热和湿热高压蒸汽锅灭菌干热和湿热高压蒸汽锅灭菌(1)(1)灭菌前准备灭菌前准备(2)(2)装放干热灭菌器装放干热灭菌器(3)(3)设备检查设备检查(4)(4)干热灭菌法干热灭菌法(5)(5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用步骤菌器的使用步骤(6)(6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步骤骤2 2间歇灭菌方法间歇灭菌方法(1)(1)灭菌方法灭菌方法(2)(2)血清凝固器使用方法血
7、清凝固器使用方法(3)(3)煮沸消毒煮沸消毒(4)(4)灭菌后处理灭菌后处理(4)干热灭菌法 此法适应于在干热情况下，不损坏、此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品，较常用于玻璃不变质、不蒸发的物品，较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。器械、器皿应清洗后再干烤，以器械、器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物碳化。防附着在表面的污物碳化。灭菌时安放物品不能过挤，不要灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。有空隙。灭菌时将箱门关紧，接上电源，灭菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约先
8、将排气孔打开约30min30min，排除，排除灭菌器中的冷空气，温度升至灭菌器中的冷空气，温度升至160160调节指示灯，维持调节指示灯，维持1.51.52h2h。灭菌完毕后或升温过程中，须在灭菌完毕后或升温过程中，须在6060以下才能打开箱门。以下才能打开箱门。(5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用步骤手提式高压锅在主体内加入手提式高压锅在主体内加入3L3L清水，立式高压锅加水清水，立式高压锅加水16L(16L(重复重复使用时应将水量补足，水变混浊使用时应将水量补足，水变混浊需更换需更换)。手提式压力锅将顶盖上的排气手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中管插入消毒桶内壁的方
9、管中(无无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用得使用)。盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气的排气阀放出冷气(水沸腾后水沸腾后排气排气101015min)15min)。关闭排气阀，使蒸汽压上升到关闭排气阀，使蒸汽压上升到规定要求，并维持规定时间规定要求，并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况按灭菌物品性质与有关情况而定而定)。达到规定时间后，对需干燥的达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸物品，立即打开排气阀排出蒸汽，
10、待压力恢复到零时，自然汽，待压力恢复到零时，自然冷却至冷却至6060后开盖取物，如为后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度然冷却，压力恢复至零，温度降到降到6060以下再开盖取物，以以下再开盖取物，以防突然减压，液体剧烈沸腾或防突然减压，液体剧烈沸腾或容器爆破。容器爆破。(6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步骤关紧锅门，打开进气阀，将蒸关紧锅门，打开进气阀，将蒸汽引入夹层进行预热，夹层内冷汽引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。空气经阻气器自动排出。夹层达到预定温度后，打开锅夹层达
11、到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排室内冷空气经锅室阻气器自动排出出.待锅室达到规定的压力与温度待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，保持时，调节进气阀，保持103.4kPa103.4kPa、121151211530min30min灭灭菌。菌。自然或人工降温至自然或人工降温至6060再开门再开门取物，不得使用快速排出蒸汽取物，不得使用快速排出蒸汽法，以防突然降压，液体剧烈法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。沸腾或容器爆破。使用自动程序控制式压力蒸汽使用自动程序控制式压力蒸汽灭菌器，在放好物品关紧门后，灭菌器，在放好物
12、品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。应严格按照厂家说明书进行。2间歇灭菌方法(1)(1)灭菌方法灭菌方法 是利用不加压力的蒸汽灭菌，某是利用不加压力的蒸汽灭菌，某些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏，可些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏，可用此法灭菌。用此法灭菌。(2)(2)血清凝固器使用方法血清凝固器使用方法 培养基中含有血清或鸡蛋特殊成培养基中含有血清或鸡蛋特殊成分时，因高热会破坏其营养成
13、分，故分时，因高热会破坏其营养成分，故用低温，可使用血清凝固，又可达到用低温，可使用血清凝固，又可达到灭菌目的，在使用该法灭菌的血清等灭菌目的，在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用。平皿也经灭菌后使用。(3)(3)煮沸消毒煮沸消毒(4)(4)灭菌后处理灭菌后处理 灭菌后物品，按正常情况已属灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染。放置，以免再度污染。取出后的合格灭菌物品，应存取出后的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁于未放于贮藏室或防尘柜内，严禁于未灭菌物品混放。凡属合格物品，应灭菌物品混放。凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。每批灭标有灭菌日期及有效期限。每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。量、温度、时间、操作者。
