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1、运城学院教案生命科学系（部）2019学年第二学期教研室名称生物科学课程名称动物生理学实验课程代码0911112B课程类型.实验课授课教师孙奴奴职称讲师授课计划授课时间：9月20日至10月25日（共5周）计划制定时间：2019年8月18日课程名称动物生理学实验课程编号0911112B总学时学时讲课：学时实验：16学时实习：学时学分数2课型必修课（）选修课（）理论课（）实验课（）任课教师孙奴奴职称讲师授课对象生物检验1702班使用教材和主要参考资料杨秀平，肖向红，动物生理学实验（第二版），高等教育出版社，2009.教学进程时间（周）12345教学内容（章节）实验一用显微镜观察四种基本组织实验二牛蛙
2、坐骨神经腓肠肌标本的制备实验三反射时的测定、反射弧的分析及搔扒反射的观察实验四刺激强度与反应的关系实验五期前收缩与代偿间歇学时分配33333实验一用显微镜观察四种基本组织一、实验目的1 .联系机能了解被覆上皮组织的结构特点及分布；2 .观察并了解结缔组织的共同特征，并联系机能了解结缔组织的结构特点及分布；3 .比较观察平滑肌、骨骼肌和心肌三种肌纤维的结构特点；4观察神经元的结构特点及尼氏体的形态与分布；5 .观察有髓神经纤维的的形态结构；6 .识别并比较观察各种血细胞与血小板的形态特征；二、实验材料四种基本组织切片；各种血涂片；三、观察内容1 .单层扁平上皮、单层立方上皮、单层柱状上皮的切片2
3、 .假复层纤毛柱状上皮切片3 .变移上皮切片4 .复层扁平上皮切片5 .疏松结缔组织、致密结缔组织、脂肪组织、网状结缔组织的切片6 .软骨组织、骨组织的切片7 .各种血细胞与血小板的形态特征8 .平滑肌、骨骼肌和心肌三种肌纤维的纵横切片9 .脊髓横切片10 .有髓神经纤维纵横切片四、思考题1 .分别选择上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织各一种绘制切片图，并注明组织名称及具体结构名称。2 .在何处可以找到尼氏体、神经原纤维？它们分别有何功能？五、结果与分析六、实验心得七、课后记实验二牛蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备一、目的要求1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法；2.学习并掌握蛙类动物坐骨神经
4、一一腓肠肌标本的制备方法。二、实验原理蛙或两栖类动物的一些基本生命活动及生理功能与温血动物近似，而且其离体组织需要的生活条件非常简单，易于控制和掌握。因此在生理学实验中，坐骨神经-腓肠肌标本是研究神经肌肉生理最常用的对象,经常用来研究神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律、肌肉收缩的特点、兴奋性的周期性变化等。三、实验材料与器械牛蛙，蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀、眼科剪刀各1把，圆头镒子、眼科镜子各1把，玻璃分针2根），蛙板和玻璃板各1块，培养皿，滴管，废物缸、锌铜弓，丝线，棉花；任氏液。四、实验步骤1、双毁髓的方法：取牛蛙一只，用左手握住，以食指压其头部前端使头部尽量前俯,右手持探针自
5、枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺向颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织，再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。此时蟾蛛下颔呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的牛蛙。否则须按上法再行捣毁；2、剪除躯干上部及内脏：用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱，左手握住牛蛙脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干上部及内脏组织，弃掉。3、剥皮：避开神经，用左手持圆头镒子夹住脊柱，右手捏住其上的皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤；拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一腿，再剥另一腿；将全部皮肤剥除后，把标本置于盛有任氏液的
6、培养皿中；4、分离坐骨神经，游离腓肠肌：首先将剥皮的牛蛙下肢标本，俯卧位用尖头镜子夹主舐骨尾端稍向上提，用粗剪刀水平剪除舐骨。将标本仰卧于蛙板上，用玻璃分针分离脊柱两侧的坐骨神经干，穿线，紧靠脊柱分别结扎神经，并剪断神经，提起线头，从能骨剪口处穿向背侧。将标本俯卧，用大头针将标本成人字型固定，用镣子提起一侧结扎神经的线头，辨清坐骨神经干走向；然后置剪刀于坐骨神经干与组织间，剪刀与下肢成2030角，紧贴股骨，胭窝，顺神经走向，把神经连同肌肉一起剪下，直至跟腱，剪断跟腱和神经。提起剪下的神经肌肉标本，一手捏住神经结扎线的线头，一手用镒子夹住腓肠肌表面,顺神经干向轻轻往下拉，去除肌肉组织后，一根坐骨
7、神经干标本便制备完成了。7、检验标本：用锌铜弓接触坐骨神经，观察腓肠肌是否出现明显收缩。五、实验要求与注意事项1 .熟悉牛蛙手术器械的使用方法，了解牛蛙腿部的局部解剖及坐骨神经的走行。2 .避免损伤牛蛙背部的腺体（尤其是眼后的大腺体），防止其分泌物溅入眼内或污染标本。3 .勿剪破牛蛙内脏，并及时清洗手及用过的器械；已剥去皮肤的组织应避免接触蟾除皮肤或其他不洁物；以防标本被污染。4 .游离神经、肌肉时不可过度牵拉，应避免用手指、金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，更不能用自来水冲洗标本。5 .制备过程中应经常向标本上滴任氏液，防止神经因干燥而失去正常兴奋性。标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟，
8、使标本兴奋性稳定。6 .移动制备好的标本时，先将游离的神经搭在腓肠肌上，再用双手分别提拿跟键和股骨断端，防止神经受力过重。六、分析与思考1 .为什么要将制备好的神经肌肉标本放在任氏液中？放在自来水或蒸镭水中可否？为什么？2.为什么锌铜弓接触坐骨神经会导致腓肠肌出现明显收缩？这一现象说明了什么问题？七、结果与分析八、实验心得九、课后记实验三反射时的测定、反射弧的分析及搔扒反射的观察一、实验目的1、学习测定反射时的方法，了解反射弧的组成。2、观察中枢抑制与交互抑制现象。3、了解脊髓反射的功能特性。二、实验原理反射是对某一刺激无意识的应答。反射的结构基础是反射弧，包括感受器、传入神经、神经中枢、传出
9、神经和效应器。从皮肤接受刺激至机体出现反应的时间为反射时。反射时是反射通过反射弧所用的时间。反射弧的任何一部分缺损，原有的反射不再出现。三、实验材料牛蛙、常用手术器械、支架、蛙嘴夹、蛙板、蛙腿夹、小烧杯、小玻璃皿、滴管、小滤纸片、棉花、秒表、纱布、0.5%及1%H2SO4任氏液、2%普鲁卡因四、实验步骤1、取牛蛙，毁脑髓，腹位固定于蛙板上。剪开右侧股部皮肤，分离坐骨神经穿线备用。2、用蛙嘴夹夹住牛蛙下颌，悬挂于支架上，将蟾除右后肢的最长趾浸入0.5%H2SO4中2-3mm,立即记下时间。当出现屈反射时，则停止计时，此为屈反射时。立即用清水冲洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。重复测定屈反射时3次，求平
10、均值。用同样方法测定左后肢最长趾的反射时。3、用手术剪自右后肢最长趾基部环切皮肤，再用手术镒剥净长趾上的皮肤。用硫酸刺激去皮的长趾，记录结果。4、改换右后肢有皮肤的趾，将其浸入硫酸溶液中，测定反射时，记录结果。5、取一浸有1%硫酸溶液的滤纸片，贴于牛蛙右侧腹部，记录抓反射的反射时。6、用一棉条包住分离出的坐骨神经，在细棉条上滴几滴2%普鲁卡因后，记录加药时间，立即做步骤4,每隔2min重复步骤4,直至无反射出现，记录时间。7、立即重复步骤5。每隔2min重复一次，直至擦或抓反射不再出现为止，记录加药至屈反射消失的时间及加药至擦或抓反射消失的时间，记录反射时的变化。8、将左侧后肢最长趾再次浸入0
11、.5%硫酸中，记录反射时有无变化。毁坏脊髓后再重复试验，记录结果。五、注意事项1、每次实验时，要使皮肤接触硫酸的面积不同，以保持相同的刺激强度。2、刺激后立即洗去硫酸，以免损伤皮肤。六、思考题：1、在这个实验中，你观察到的哪个现象表明中枢内存在着兴奋的扩散？2、普鲁卡因麻醉坐骨神经后，为什么感觉技能丧失，运动技能后丧失？七、结果与分析八、实验心得九、课后记实验四刺激强度与反应的关系一、目的要求1.学习神经-肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法；2、深入理解骨骼肌的收缩强度与刺激大小的关系及其机制；3.观察刺激强度与肌肉收缩形式之间的关系；二、实验原理生理学中兴奋性是指细胞在受刺激时产生动作
12、电位的能力。肌肉组织具有兴奋性，受到刺激后会产生动作电位，发生反应，表现为肌肉收缩。引起组织发生反应的刺激是适宜的有效刺激。刚能引起收缩反应的最小刺激强度称为阈强度，该刺激为阈刺激。就单条骨骼肌纤维而言，它对刺激的反应具有“全或无”的性质，但牛蛙的腓肠肌内含有许多条骨骼肌纤维，它们的兴奋性不同，因而所需的阈刺激强度也不同。如果刺激强度低于任何肌纤维的阈值，则没有动作电位产生，无收缩反应；当刺激强度增加到能引起少数肌纤维兴奋时，可产生较少的复合动作电位，记录到较低的肌肉收缩波形；继续增加刺激强度，兴奋的纤维数量增多；当刺激强度增加到使全部肌纤维兴奋时，复合动作电位幅度达到最大，肌肉收缩幅度也最大
13、；再增加到刺激强度时，复合动作电位的幅度和肌肉收缩幅度都不会再增加。由此可见，整块肌肉对刺激的反应不表现“全或无”，而是呈现出在一定范围内其收缩力与刺激强度成正比的关系，即随着阈上强度的不断增加，骨骼肌的收缩反应相应加大，直至出现最大反应。此时的最小刺激强度称为最适强度，该刺激为最适刺激。三、实验材料牛蛙；生物机能实验系统；保护电极；蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀、眼科剪刀各1把，圆头镣子、眼科镜子各1把，玻璃分针2根），蛙板和玻璃板各1块，蛙足钉；培养皿，滴管，废物缸、丝线，棉花；任氏液。四、实验步骤（一）标本的制备1 .破坏脑和脊髓：取牛蛙一只，用左手握住，以食指压其头部前端使头部
14、尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺向颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织，再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。此时牛蛙下颔呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的牛蛙。否则须按上法再行捣毁。2 .剥离皮肤：剥离一侧下肢自大腿根部起的全部皮肤，然后将牛蛙固定于蛙板上；3 .分离神经：于肱二头肌与半膜肌之间，分离坐骨神经，并在神经下穿线备用；4 .分离腓肠肌：在同侧小腿腓肠肌处分离肌腱，并穿一丝线结扎，在结扎处下方剪断肌腱，用剪刀沿腓肠肌两侧剪开筋膜，游离出腓肠肌；5 .标本固定：在牛蛙下肢膝关节旁用蛙足钉固定，以保证腓肠肌收
15、缩的正常记录；（二）仪器及标本的连接1 .连接换能器：将腓肠肌跟腱上的丝线连接于张力换能器的应变片上，调整换能器的高度，使肌肉处于自然拉长的状态（不宜过紧过松）；2 .将保护电极勾在已经分离出的坐骨神经上，并保证神经与电极接触良好；骨骼肌收缩实验装置一示意图（H）仪器设置1 .打开计算机，启动生物机能实验系统，在“实验模块”中选择“肌肉神经实验”-刺激强度与反应的关系；2 .参数设置：起始刺激强度：250mV;刺激强度增量：20mV；刺激时间间隔：1000ms；刺激次数：100;（四）实验观察1 .可采用系统程控方式，自动完成本次实验；2 .也可采用手动设置方式完成本次实验，实验设置、调试方式如下：（1）使用单脉冲刺激方式，波宽调至并固定在1ms,刺激强度从O开始逐渐增大；首先找到能引起肌肉收缩的最小强度，该强度即是阈强度；（2）继续增大刺激强度，直至连续3乂个肌肉收缩曲线的幅度不再随刺激增高为止，读出刚刚引起最大收缩的刺激强度，即为最适刺激强度。五、注意事项1 .经常用任氏液浸润标本，保持生理活性；2 .每次刺
