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1、实验五 细菌分离技术一、实验目的一、实验目的1. 1. 掌握微生物的分离与接种技术掌握微生物的分离与接种技术2. 2. 学会用平板划线法分离微生物学会用平板划线法分离微生物二、注意事项：二、注意事项： 1 1、要提前了解有关微生物的特性、要提前了解有关微生物的特性 2 2、做好准备工作（培养基、标准、做好准备工作（培养基、标准 菌株及其他材料的准备）菌株及其他材料的准备） 3 3、无菌操作：、无菌操作： 无菌操作转接培养物无菌操作转接培养物三、实验原理：三、实验原理： 从样品中分离纯化细菌从样品中分离纯化细菌 样品中混杂着大量的细菌，从里面分离，样品中混杂着大量的细菌，从里面分离，得到只含有这
2、一种细菌的纯培养得到只含有这一种细菌的纯培养 纯培养纯培养(Pure culture)(Pure culture)： 微生物学中将在实验室条件下从一个细胞微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养 四、实验器材四、实验器材样品样品; ;分离培养基分离培养基; ; 培养箱，摇床培养箱，摇床0.9% 0.9% ，接种环，接种环，记号笔，酒精灯，试管架，记号笔，酒精灯，试管架，无菌生理盐水等。无菌生理盐水等。五、实验步骤五、实验步骤1.1.采样采样: :无菌采集样品无菌采集样品2.2.分离：用分离培养基采用划线法进行分离：用分离培养基
3、采用划线法进行3.3.培养：培养：3737，24h24h48h48h4.4.纯分：钓取单个菌落纯分：钓取单个菌落 制备制备纯纯培养物培养物1.1.采样采样（）无菌采集样品（）无菌采集样品（）要有针对性（）要有针对性分离分离（）平板划线分离法（）平板划线分离法（2 2）释液倾注平皿）释液倾注平皿 称取样称取样1.0g1.0g， 放入盛放入盛99m99m无菌水并无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡使样品均匀带有玻璃珠的三角瓶中，振荡使样品均匀分散成为悬液（分散成为悬液（1010-2-2）。用）。用1m1m的无菌吸的无菌吸头从中吸取头从中吸取0.5ml0.5ml样品悬液，注入分装有样品悬液，注入分装有
4、4.5ml4.5ml无菌水的试管中，吹吸无菌水的试管中，吹吸3 3次，振荡均次，振荡均匀（匀（1010-3-3）。同样方法，配置成稀释度为）。同样方法，配置成稀释度为1010-4-4，1010-5-5，1010-6-6的样品溶液，各样取的样品溶液，各样取mLmL加在平皿中，倾注培养基加在平皿中，倾注培养基（3 3）涂布）涂布 用一支新的无菌吸头，分别由各用一支新的无菌吸头，分别由各浓度样品稀释液中各吸取浓度样品稀释液中各吸取0.1mL0.1mL，分，分别放入培养基平板上，用无菌玻璃涂别放入培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做棒涂匀。每个浓度做2 2个平板。个平板。3.3.培养培养 将培养基平板倒置于将培养基平板倒置于3737温箱中培温箱中培养养24h24h48h48h，观察菌落特征，观察菌落特征4.4.制备纯培养制备纯培养 将培养后所需要的单个将培养后所需要的单个菌落菌落分别钓分别钓出，划线于平板上，出，划线于平板上，3737培养培养48h48h检查检查菌落是否单纯，也可以用显微镜检查是菌落是否单纯，也可以用显微镜检查是否是纯的细菌否是纯的细菌
