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1、乳酸菌检验原始记录（平板计数法）检验单位检验员检验日期至环境条件温度,相对湿度%检验依据GB4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验样品名称产品批号仪器设备及耗材：电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、移液器、厌氧罐培养基及试剂：MC培养基：m1.配制日期：MRS培养基：m1.配制日期：莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基：m1.配制日期：生理盐水：m1.配制日期：实验过程：1.样品制备1.2制备样品稀释液根据样品状态，无菌操作，称取25g吸取25m1.样品，加入到225m1.无菌生理盐水中均质（或混匀），制成1:10样品匀液。用I
2、m1.无菌吸管或微量移液器吸取1：IO样品匀液Im1.,沿管壁缓慢注于盛有9m1.稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。按上面步骤操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次Im1.无菌吸管或吸头。2.乳酸菌计数乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明样品中所包括乳酸菌菌属培养条件的选择及结果说明仅包括双歧杆菌属按GB4789.34的规定执行仅包括乳杆菌属按照2.3操作。结果即为乳杆菌属总数仅包括嗜热链球菌按照2.2操作。结果即为嗜热链球菌属总数同时包括双歧杆菌属和乳杆菌属1按照2.3操作
3、。结果即为乳酸菌总数2如需单独计数双歧杆菌属数目，按照操作同时包括双歧杆菌属和嗜热链球菌1按照2.1和2.2操作，二者结果之和即为乳酸菌总数2如需单独计数双歧杆菌属数目，按照2.1操作同时包括乳杆菌属和嗜热链球菌1按照2.1和23操作。二者结果之和即为乳酸菌总数22.2结果为嗜热链球菌总数32.3结果为乳杆菌属总数同时包括双歧杆菌属、乳杆菌属和嗜热链球菌1按照2.2和2.3操作。二者结果之和即为乳酸菌总数2如需单独计数双歧杆菌属数目，按照2.1操作2.1双歧杆菌计数根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2个一3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取Im1.样品匀液于灭菌平服内，每个稀释度做两个平皿
4、。稀释液移入平皿后，将冷却至48。C的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良的MRS培养基倾注入平皿约15m1.,转动平皿使混合均匀。361厌氧培养72h2h（-/时/_/时），培养后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。2.2 嗜热链球菌计数根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2个一3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取Im1.样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48C的MC培养基倾注入平皿约15m1.,转动平皿使混合均匀。36C1C需氧培养72h2h,（/_/时/_/时）培养后计数。嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等
5、偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2mm1.mm,菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。2.3 乳杆菌计数根据待检样品活菌总数的估计，选择2个一3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取Im1.样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48C的MRS琼脂培养基倾注入平皿约15m1.,转动平皿使混合均匀。36C1C厌氧培养72h2h（-/_/时/_/时）。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。样品序号双歧杆菌各稀释度平板上的菌落数结果CFUm1.CFU第一稀释度：第二稀释度：.第三稀释度：样品1样品2样品3样品4样品5样品序号嗜热链球菌各稀释度
6、平板上的菌落数结果CFUm1.CFUr第一稀释度：第二稀释度：.第三稀释度：样品1样品2样品3样品4样品5品样序乳杆菌各稀释度平板上的菌落数结果CFUm1.CFU第一稀释度：第二稀释度：第三稀释度：样品1样品2样品3样品4样品53菌落13.1选菌落数,3.2其I若片状落数。3.3当由数技菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；君落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又
7、很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4结果表述1 .若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（m1.）样品中菌落总数结果。2 .若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算。N=（.+o.%）d式中：N一一样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n一一第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2一一第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。3 .若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则
8、对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4 .若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5 .若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6 .若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU-300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。计算过程：方法报告1 .菌落总数小于Ioe）CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。2 .菌落总数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用前2位数字，后面用。代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。3 .称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFm1.为单位报告。复核人报告人报告日期复核日期
