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1、大鼠抗精子抗体elisa试剂盒技术参数使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中抗精子抗体(ASA力含量。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠抗精子抗体(AsAb)水平。用纯化的大鼠抗精子抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入抗精子抗体,再与HRP标记的抗精子抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗精子抗体(ASAm呈正相关。用酶标仪在45。八侬波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠抗精子抗体(AAb)浓度。标本要
2、求1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-2。C保存,但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品,因NN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤工标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。:LooPgm(S号标准品15*1的原倍标准品加入15,O标准品稀群液5Opgml4号标准品工5。山的S号标准品加入15。川标准品稀释液25pgMrSO,l的4号标准品加入156l标准品稀释液12.5pgkv2号标准品ISoH的3号标准品加入SOp.I标准品稀释液6.25pgFv1号标准品工5。川
3、的2号标准品加入15。川标准品稀释液2 .加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在醉标包被板上标准品准确加样5。川,待测样品孔中先加样品稀释液4。山,然后再加待测样品IaJ(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3 .温育:用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液:将-50倍浓缩洗涤液用蒸饱水-50倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置3。秒后弃去,如此重复5次,拍干。6 .加酶:每孔加入酶标试剂SOpJ,空白孔除外。7 .温育:操作同8 .洗涤:操作同5。
4、名显色:每孔先加入显色剂A5O丛/,再加入显色剂B5OJ,轻轻震荡混匀,37C避光显色15分钟.1。终止:每孔加终止液夕终止反应(此时蓝色立转黄色)。Il.测定:以空白空调零,450八小波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后25分钟以内进行。操作程序总结:2.加入准备好的样品和标准品,37反应30分钟3洗板5次,加入酶标试剂,37C反应30分钟4 .洗板5次,加入显色液A、B,37C反应3分钟5 .加入终止液6 .1S分钟之内度OD值7.计算计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的。D值由标准曲线查出相应的浓度:再乘以稀释倍数;或用标准物的
5、浓度与。D值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-3O分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的。D值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(八倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(5)05 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。q本试剂不同批号组分不得混用。1O.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存:2 .有效期:6个月