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1、实验三实验三 观察观察DNADNA和和RNARNA在细胞在细胞 中的分布中的分布原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。Unna染色法：Unna染色法：1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁（mehtyl-green-pyronim）染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。1940年Brachet研究证明用甲基绿哌洛宁对
2、DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后，由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被哌洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。实验目的1、学会准备本实验。2、练习并熟练掌握本实验操作过程。3、学会指导学生实验。课前准备1、实验材料用具：人的口腔上皮细胞或蚕豆叶表皮，洋葱表皮大烧杯，小烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜2、质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为0.8%的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取A液20 mL,B液80
3、mL配成染色剂，使用时现配。A液：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入100 mL蒸馏水中溶解，放入棕色瓶中备用。B液：取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL。取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL。取稀释的乙酸钠溶液30 mL和乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的溶液），蒸馏水。Unna试剂甲液5%派洛宁水溶液，6ml2%的甲基绿水溶液，6ml蒸馏水，16ml乙液，1mol/L乙酸钠，16ml用时混合。乙液，1mol/L乙酸钠，A、取乙酸6 mL-100mLB、乙酸钠13.5 g-100mLA 40mL+B 60ml即可。学生预习实验。学生预习实验。（一）老
4、师介绍实验的原理以及科学认识的模式原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。科学认识模式是“假设检验”，即在提出问题后，接着提出猜测性的假设，然后用观察和实验来检验。这种科学认识模式的程序是问题试探性假设批判与检验。这是科学探究的一般程序，也是探究性学习的一般程序。（二）找一个预习作业做得比较好的同学，（二）找一个预习作业做得比较好的同学，陈述
5、实验如何进行A.问题的提出：DNA和RNA在细胞中是怎么分布的？B.试探性假设：DNA分布在细胞核，RNA分布在细胞质。C.实验检验：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观察两种颜色出现的部位来判断DNA和RNA在细胞中的分布。实验方法步骤1.取口腔上皮细胞（1）在洁净的载玻片上，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。（2）用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片的液滴中涂抹几下。（3）点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。2.水解（1）在小烧杯中加入30 mL质量分数为8%的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。（2）在大烧杯中加
6、入30 温水。（1）用吸水纸吸去载玻片上的水分。（2）将吡罗红甲基绿染色剂滴2滴在载玻片上，染色5 min。（3）吸去多余染色剂，盖上盖玻片。5.观察 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。洋葱表皮细胞结论：通过各种动植物实验材料的观察，同学们观察到的结果非常相似，在细胞核部分被染成了绿色，而在细胞质部分被染成了红色。说明DNA主要分布在细胞核中，RNA主要分布在细胞质中。注意事项 1.材料的选择 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(
7、为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)2.取材要点 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。4.安全要点 用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。1、原理与解析 (1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。(3)盐酸的作用 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。请你把观察到的实验现象记录在下表中，分析得出结论。选用材料细胞核颜色细胞质颜色口腔上皮细胞洋葱表皮细胞自选材料结论1绘一简图，显示Unna染色法制作的标本，在细胞质及细胞核内的染色结果上有何区别。这种染色差异说明什么？2、盐酸有什么作用？3、简述实验原理。
