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1、电子显微镜技术电子显微镜技术及其在病理诊断上的应用及其在病理诊断上的应用一、电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术 电子显微镜技术电子显微镜技术 电电 镜镜 样品制备样品制备 发明背景：发明背景：电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发明使用。行径，在上述理论的指导下发明使用。电子显微镜的类型：电子显微镜的类型：透射电子显微镜：观察样品内部超微结构。透射电子显微镜：观察样品内部超微结构。扫描电子显微镜：展示样品表面形貌。扫描电子显微镜：展示样品表面形貌。扫描电镜和透射电镜比较扫描电镜和透射电镜比较 项目项目扫描电镜扫描电镜透
2、射电镜透射电镜分辨本领分辨本领70100 2 发大倍数发大倍数2040万倍万倍100万倍万倍加速电压加速电压150 KV几十千伏几百千伏几十千伏几百千伏图像特点图像特点景深长、三维立体结构景深长、三维立体结构景深小、两维平面结构景深小、两维平面结构样品制备样品制备固定固定-脱水脱水-临界点干燥临界点干燥-喷涂金属喷涂金属固定固定-脱水脱水-包埋包埋-超薄切片超薄切片-重金属染色重金属染色样品尺寸样品尺寸1cm350100nm切片切片样品损伤样品损伤光斑直径只有几十埃的电子束在光斑直径只有几十埃的电子束在样品上扫描，对样品损伤极小样品上扫描，对样品损伤极小大约大约1m直径电子束打到样品上，造成一
3、直径电子束打到样品上，造成一定程度损伤定程度损伤样品成像信号样品成像信号二次电子、背散射电子二次电子、背散射电子透射电子透射电子发大倍数调节发大倍数调节用衰减器改变扫描线圈电流，进用衰减器改变扫描线圈电流，进行放大率调节行放大率调节调整中间镜电流改变放大率调整中间镜电流改变放大率决定分辨率决定分辨率因素因素入射电子束直径决定图像分辨率。入射电子束直径决定图像分辨率。加速电压、透镜缩小率、电源稳定加速电压、透镜缩小率、电源稳定度及像差决定电子束斑直径度及像差决定电子束斑直径加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度等影响分辨率等影响分辨率样品的制备样品的制备透射电镜
4、样品制备的常用方法：透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。切片、冷冻复型、负染色等。扫描电镜样品制备：扫描电镜样品制备：除保存样品表面形貌除保存样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，不结构外，只要求样品干燥并能导电，不需包埋和切片。需包埋和切片。二、电子显微镜技术二、电子显微镜技术 在病理诊断上的应用在病理诊断上的应用神经内分泌颗粒：神经内分泌颗粒：神经内分泌肿瘤神经内分泌肿瘤黑色素小体：无色素性黑色素小体：无色素性黑色素瘤黑色素瘤LangerhanLangerhans s细胞颗粒：细胞颗粒：组织细胞增生症组织细胞增生症Weibel-PaladeWeibe
5、l-Palade小体：小体：血管内皮瘤及肉瘤血管内皮瘤及肉瘤肌微丝：肌微丝：肌源性肿瘤肌源性肿瘤细胞质内晶体：细胞质内晶体：腺泡状软组织肉瘤腺泡状软组织肉瘤板层小体：板层小体：肺泡细胞癌肺泡细胞癌成簇糖原颗粒：成簇糖原颗粒：EwingsEwings瘤瘤(一一)特异性超微结构特异性超微结构 Neurosecreting granulesSize and shape of melanosome of stage，Langerhans cell:rod-shaped and tennis-racket-shaped Alveolar soft part sarcoma:crystalloids （二
6、）细胞膜及其特化物（二）细胞膜及其特化物 细胞外形细胞外形 纤毛纤毛 微绒毛微绒毛 细胞连接细胞连接 基板和外板基板和外板Malignant pleural mesothelioma:microvilli Junction complexJunction complex Desmosomes Desmosomes粘液粘液颗粒：粘液性上皮（单位膜包低、中电子颗粒：粘液性上皮（单位膜包低、中电子密度的颗粒密度的颗粒oror网状物质，偶见电子密度的核心网状物质，偶见电子密度的核心“牛眼状牛眼状，bulls eye typebulls eye type”）酶元酶元颗粒：腺泡细胞来源（唾液腺癌、胰腺外颗
7、粒：腺泡细胞来源（唾液腺癌、胰腺外分泌腺癌、胃癌）单位膜包电子密度高分泌腺癌、胃癌）单位膜包电子密度高APUDAPUD颗粒（神经内分泌颗粒）：颗粒（神经内分泌颗粒）：ApudomaApudoma与溶酶体与溶酶体区别区别 溶酶体：大小、形状差异大溶酶体：大小、形状差异大 神经内分泌颗粒：较规则神经内分泌颗粒：较规则（三）细胞合成产物（三）细胞合成产物Mucous cystadenoma of ovary:bulls-eye granules Mucous cystadenoma of ovary:granules with reticular pattern Acinic cell carcin
8、oma:zymogen granules例例1 1：男男,39,39岁岁,发现右侧颈部无痛肿物发现右侧颈部无痛肿物1 1年余年余,花生花生米大米大,取肿物做活检。光镜取肿物做活检。光镜:增大的淋巴结增大的淋巴结,结构紊结构紊乱乱,但仍残留滤泡与淋巴窦但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞量胞质丰富的嗜伊红细胞,直径约直径约20m20m。核圆。核圆,卵卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构见有似网球
9、拍或柄的双膜结构(Birbeck(Birbeck 颗粒颗粒),),证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞 。病理诊断：病理诊断：淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。生症。朗格汉斯细胞组织细胞增生症朗格汉斯细胞组织细胞增生症 双模构成的似网球拍状的双模构成的似网球拍状的Birbeck 颗粒。颗粒。EM 10 000 例例2 2：男男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检检,病理诊断为淋巴组织增生。不久颌下淋巴结又病理诊断为淋巴组织增生。不久颌下淋巴结又肿大肿大,再次淋巴结再次淋巴结(颌下颌下)活检病理诊
10、断为恶性淋活检病理诊断为恶性淋巴瘤巴瘤(免疫母细胞型免疫母细胞型)。电镜。电镜:瘤细胞大、多边形瘤细胞大、多边形或不规则形或不规则形,核质比大核质比大,核膜弯曲核膜弯曲,不规则或奇特的不规则或奇特的内陷内陷,核常染色质丰富核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质网栏状大核仁。少许胞质突突,胞质内核糖体丰富胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少。质膜间其他细胞器稀少。质膜间见发育不良的桥粒样连接。见发育不良的桥粒样连接。病理诊断病理诊断:颌下淋巴结转移癌。随后临床发颌下淋巴结转移癌。随后临床发现鼻咽癌原发灶。现鼻咽癌原发灶。转移癌转移癌 瘤细胞大，胞核大，核膜不平滑，显著增大的核质比，质膜间有桥粒样连接
11、，瘤细胞大，胞核大，核膜不平滑，显著增大的核质比，质膜间有桥粒样连接，胞质含少许欠发达的细胞器，网栏状大核仁。胞质含少许欠发达的细胞器，网栏状大核仁。EM 10 000 例例3 3：男男,30,30 岁岁,肝穿活检。光镜诊断肝穿活检。光镜诊断:慢迁肝。虽慢迁肝。虽未见典型碎屑样坏死未见典型碎屑样坏死,但不除外活动性变化。电镜但不除外活动性变化。电镜见肝细胞大见肝细胞大,疏松疏松,细胞周围间隙加大细胞周围间隙加大,有微绒毛化有微绒毛化,滑面内质网增生滑面内质网增生,内含管状体内含管状体,肝窦内充塞胶原纤肝窦内充塞胶原纤维。有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶维。有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶,周围有淋
12、周围有淋巴细胞浸润。巴细胞浸润。电镜诊断电镜诊断:慢性迁延性乙型病毒性肝炎有轻慢性迁延性乙型病毒性肝炎有轻微活动。微活动。慢性迁延性乙型病毒性肝炎慢性迁延性乙型病毒性肝炎滑面内质网增生滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原管状体。腔内含量多的乙肝表面抗原管状体。EM EM 8 0008 000国内外对电镜诊断的价值国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面在肿瘤应用方面报道较多报道较多,占占65%65%。涉及病原学的诊断涉及病原学的诊断,特别是怀疑病毒、支原特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等微生物感染的标本应充分使体、衣原体等微生物感染的标本应充分使用电镜。用电镜。电镜标本要求尽可能活体取材电镜标本要求尽可能活体取材,立即投入预立即投入预冷的固定液中固定冷的固定液中固定,以利完好地保存细胞的以利完好地保存细胞的超微结构。超微结构。半薄切片选区定位要求准确。半薄切片选区定位要求准确。
