维生素EVitaminEVE试剂盒说明书.docx

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1、维生素E(VitaminE,VE)试剂盒说明书微量法100T/18S测定意义:维生素E(VitaminE)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是生物体中最主要的抗氧化剂之一,能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。测定原理:VE还原Fe?+为Fe?+,Fe?+与1,10.菲罗咻产生有色络合物,在53Onm有特征吸收峰。自备实验用品及仪器:天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、漩涡震荡仪。试剂组成和配制:提取液:液体100mLXl瓶,

2、49保存。试剂一:液体2mLl瓶,4C避光保存。试剂二:液体2mll支,4C保存。试剂三:液体2mll支,4C保存。试剂四:液体6mLl瓶,4C保存。样本处理:1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:510的比例(建议称取约0.1g,加入ImL提取液)加入提取液,匀浆后用提取液定至ImL定至在漩涡混匀仪上震荡5min,于25,500Og离心IOmin,取上层测定。2.细胞:按照细胞数量(IO,个):提取液体积(mL)为5001000:1的比例(建议500万细胞加入Iml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min)后在漩涡混匀仪上震荡5min,于25

3、震,500Og离心IOmin,取上层测定。3.血清:取0.1mL,力口0.9mL提取液,漩涡仪混匀上震荡5min,于25,500Og离心Iomin,取上层测定。测定操作:对照管测定管样品(L)100100试剂一(L)2020试剂二(L)20试剂三(L)20充分混匀,252反应5min试剂四(L)6060充分混匀,于微量石英比色皿用6孔板,无水乙醇调零,测定53Onm处吸光值,记为A对照管和A测定管,AA=A测定管-A对照管。计算公式:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y=0.22x+0.0065R2=0.99781 .按照蛋白含量计算VE含量(gmgprot)=(A-0.0065

4、)0.22V反总(V样XCPr)=9.09(A-0.0065)Cpr2 .按照样本质量计算VE含量(gg)=(A-0.0065)0.22xV反总(V样xWV样总)=9.09(A-0.0065)W3 .按照细胞数量计算VE含量(g104cell)=(A-0.0065)0.22V反总(V样X细胞数量V样总)=9.09(A-0.0065)细胞数量4 .按照液体体积计算VE含量(gmL)=(A-0.0065)子0.22XV反总V样xl=90.9(A-0.0065)V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL:Cpr:蛋白浓度,mg/mL:W:样本质量,

5、gb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线:y=0.11x+0.0065R2=0.99781 .按照蛋白含量计算VE含量(gmgprot)=(A-0.0065)0.11V反总子(V样XCPr)=18.18(A-0.0065)Cpr2 .按照样本质量计算VE含量(gg)=(A-0.0065)0.11V反总(V样xWV样总)=18.18(A-0.0065)W3 .按照细胞数量计算VE含量(g104cell)=(A-0.0065)0.11V反总(V样X细胞数量V样总)=18.18(A-0.0065)细胞数量4 .按照液体体积计算VE含量(gmL)=(A-0.0065)0.11xV反总小V样l三181.8(A-0.0065)V反总:反应总体积,0.2ml;V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL:W:样本质量,g注意事项:若反应体系产生沉淀,需要将样品进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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