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1、保健食品功能检验与评价方法（2023年版）有助于润肠通便1.1 试验项目1.1.1 动物实验1.1.1.1 体重1.1.1.2 小肠运动实验1.1.1.3 排便时间1.1.1.4 粪便重量1.1.1.5 粪便粒数1.1.1.6 粪便性状1.1.2 人体试食试验1.1.2.1 症状体征1.1.2.2 粪便性状1.1.2.3 排便次数1.1.2.4 排便状况2.1 试验原则2.1.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.1.2 除对便秘模型动物各项必测指标进行观察外，还应对正常动物进行观察，不得引起动物明显腹泻。2.1.3 排便次数的观察时间试验前后应保持一致。2.1.4 在进行人体试
2、食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。2.2 结果判定2.2.1 动物实验：排粪便重量和粪便粒数一项结果阳性，同时小肠运动实验和排便时间一项结果阳性，可判定该受试样品有助于润肠通便动物实验结果阳性。2.2.2人体试食试验：排便次数明显增加，同时粪便性状和排便状况一项结果明显改善，可判定该受试样品具有有助于润肠通便的作用。有助于润肠通便检验方法1动物实验1.1 小肠运动实验1.1.1 原理经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯或洛哌丁胺，建立小鼠小肠蠕动抑制模型，计算一定时间内小肠的墨汁推进率，来判断模型小鼠胃肠蠕动功能。1.1.2 仪器和材料1.1.2.1 仪器和试剂手术剪、眼科锦、直尺
3、、注射器、天平、活性炭粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯或洛哌丁胺。1.1.2.2 试剂配制1.1.2.2.1 墨汁的配制：准确称取阿拉伯树胶100g,加水800mL,煮沸至溶液透明，称取活性碳（粉状）50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后加水定容到1000mL,于冰箱中4C保存，用前摇匀。1.1.2.2.2 复方地芬诺酯混悬液的配制：浓度为0.025%。复方地芬诺酯片，每片含复方地芬诺酯2.5mg,取复方地芬诺酯片25mg（10片Q用研钵研碎呈粉末后加水至100mL,临用前配制。1.1.2.23洛哌丁胺溶液的配制洛哌丁胺剂量为24mgkgBW依据洛哌丁胺的实用剂量取用，按实验所需浓度配制，可加热
4、待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。1.1.3实验方法1.13.1实验动物选用成年雄性小鼠，体重18-22g,每组10-15只。1.1.3.2剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组，一个阴性对照组和一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组和模型对照组同样途径给蒸镭水。受试样品给予时间7天，必要时可延长至15天。1.13.3实验步骤1.1.3.3.1模型的建立给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。模型对照组和三个剂量组灌胃给予复方地芬诺酯（5mgkgBW）或洛哌丁胺（24mgZkgBWX空白对照组给蒸储水。1.13.3.2指标
5、测定的方法给复方地芬诺酯或洛哌丁胺后0.5小时后，剂量组分别给予含相应受试样品的墨汁（含5%的活性炭粉、10%阿拉伯树胶）阴性和模型对照组给墨汁灌胃。25分钟后立即脱颈椎处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按下式计算墨汁推进率：果汁推进长度（Cm）墨汁推进率（%）=X100%小肠总长度（Cm）数据处理及结果判定墨汁推进率需进行数据转换，X=Sy，式中P为墨汁推进率，用小数表示。在进行方差分析时，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算尸值F值%O5,结论：各
6、组均数间差异无显著性；尸值2R）q5,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。在模型成立的前提下，受试样品组小鼠的墨汁推进率显著高于模型对照组的墨汁推进率时，可判定该项实验结果阳性。1.2排便时间、粪便粒数和粪便重量的测定1.2.1 原理经口灌胃给予造模药物复方地芬诺酯或洛哌丁胺，建立小鼠便秘模型，测定小鼠的首粒排黑便排便时间、5或6小时内排便粒数和排便重量，来反映模型小鼠的排便情况。1.2.2 仪器和材料1.22
7、1仪器和试剂眼科锻、注射器、分析天平、活性炭粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯、洛哌丁胺。1.2.2.2试剂配制1.2.2.2.1 墨汁的配制：同小肠运动实验。1.2.2.2.2 复方地芬诺酯混悬液的配制：浓度为0.05%O复方地芬诺酯片，每片含2.5mg复方地芬诺酯。取复方地芬诺酯片50mg（20片）用研钵研碎后加蒸储水至100mL,临用前配制。1.1.2.2.3洛哌丁胺溶液的配制：洛哌丁胺剂量为4-7mgkgBW0依据洛哌丁胺的实用剂量取用，按实验所需浓度配制，可加热待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。1.2.3实验方法1.2.3.1实验动物选用成年雄性小鼠，体重18-22g,每组10-15只。1.
8、23.2剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组，一个阴性对照组和一个模型对照组。以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组和模型对照组同样途径给蒸馀水。受试样品给予时间7天，必要时可适当延长至15天。1.2.3.3实验步骤1.23.3.1模型的建立给受试样品7天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。阴性对照组给蒸储水，模型对照组和三个剂量组濯胃给予复方地芬诺酯(IomgkgBW)或解TK(4-7mgkgBWX1.2.3.3.2指标测定的具体方法给复方地芬诺酯或洛哌丁胺0.5小时后，阴性对照组和模型对照组小鼠用墨汁灌胃，剂量组给予含受试样品的墨汁，动物均
9、单笼饲养，正常饮水进食。从灌墨汁开始，记录每只动物首粒排黑便时间、5或6小时内排黑便粒数及重量。1.2.4 数据处理及结果判定资料可用方差分析，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算尸值，尸值结论：各组均数间差异无显著性；尸值2R)05,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。在小肠便秘模型成立的前提下，受试样品组小鼠的首粒排黑便时间明显短于模型对照组，即可判定该项指标结果阳性。5或6小时内排黑便粒数明
10、显高于模型对照组，可判定该项指标结果阳性。5或6小时内排黑便重量明显高于模型对照组，可判定该项指标结果阳性。1.2.5 结果判定5或6小时内排粪便重量和粪便粒数任一项结果阳性，同时小肠运动实验和排便时间任一项结果阳性，可判定该项实验结果阳性。1.2.6 注意事项1.2.6.1 实验中应将复方地芬诺酯悬液不断振荡，以保持其浓度均一。洛哌丁胺溶液在4C保存有时会出现结晶，放置室温一段时间或加热后可溶解。1.2.6.2 墨汁配制时待阿拉伯胶加热透明后再加入碳末。1.2.6.3 应去除小鼠排出第一粒黑便前的粪便。1.3粪便性状感官描述2人体试食试验2.1 纳入受试者标准2.1.1 排便次数减少和粪便硬
11、度增加者。2.1.2 大便一周少于3次者。2.1.3 无器质性便秘者。2.1.4 习惯性便秘者。2.2 受试者排除标准2.2.1 不能经口进食者或不能按规定服用受试样品者。2.2.2 主诉不清者。2.2.3 体质虚弱无法进行试验者。2.2.4 30天内进行过外科手术引起便秘症状发生者。2.2.5 因严重器质病变引起的近期排便困难者（结肠癌，严重的肠炎、肠梗阻，炎症性肠病等）2.2.6 便秘困难并伴有疼痛者。2.2.7 30天内发生过急性胃肠道疾病者。2.2.8 孕期及经期妇女。2.2.9 合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身疾病患者。2.2.10 有其它伴随疾病正在治疗者。2.2.11 短
12、期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。2.3 试验设计及分组要求采用自身和组间对照两种试验设计。按受试者的便秘症状（排便次数、粪便性状、症状持续时间等）随机分为试食组利对照组，尽可能考虑到影响结果的主要因素如年龄、性别、日常饮食、便秘原因等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。2.4 受试样品的剂量和使用方法试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照，也可服用具有同样作用的阳性物。按盲法进行试食试验。受试样品给予时间7天，必要时可以延长至15天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。2.5 观察指标：2.5.1 安全性指标
13、2.5.1.1 一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等2.5.1.2 血、尿、便常规检查2.5.1.3 肝、肾功能检查2.5.1.4 胸片、心电图、腹部部B超（在试验开始前检查一次）2.5.2 功效性指标每日对受试者进行询问并记录，同时记录受试者服用受试样品前6天及试验时的情况。2.5.2.1 每日排便次数记录受试者试食前后排便次数的变化。2.5.2.2 排便状况根据排便困难程度（腹痛或肛门烧灼感、下坠感、不适感，有否便频但排便困难而量少等症状）分为I-IV级，统计积分值。I级（0分。排便正常II级（1分）仅有下坠感、不适感II级（2分J下坠感、不适感明显，或有便频但排便困难而量少，较少
14、出现腹痛或肛门烧灼感IV级（3分J经常出现腹痛或肛门烧灼感，影响排便2.5.23粪便性状根据布里斯托（BriStOl）粪便性状分类法将粪便性状分为I11I级。I级（0分J像香肠或蛇，平滑而且软；像香肠，但在它的表面有裂痕；软的团块，有明显的边缘（容易排出）H级（1分）香肠形状，但有团块；松散的块状，边缘粗糙，像泥浆状的粪便HI级（2分）分离的硬团，像果核（不易排出）252.4日常饮食情况：纤维素类食物的比例。2.5.2.5记录有无不良反应（恶心、胀气、腹泻、腹痛及粪便异常等）2.6数据处理和结果判定试验数据为计量资料，可用，检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对，检验，两组均数比较采用成组，检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行f检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用检验或秩和检验；但变异系数太大（如Cv50%）的资料应用秩和检验。试食前后试食组自身比较排便次数明显增加，排便状况和粪便性状二项指标中一项指标积分明显下降，差异有显著性，试食后试食组与对照组比较，排便次数、排便状况和粪便性状任一项明显改善，差异有显著性，可判定该受试样品具有有助于润肠通便的作用。
