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1、ICSxx.xxx.xxXXX团体标准T/CRHAXXX-XXXX石蜡样本制作微阵列组织芯片通用技术规范GeneraltechnicalspecificationfortissuemicroarrayproducedbyParaffin-embeddedsamples（征求意见稿）XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布中国研究型医院学会发布目次前言I1范围12规范性引用文件13术语和定义14总则25基本原理26试验方法27信息存储38性能要求39运输和贮存4参考文献5本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由中国研究型医院
2、学会临床数据与样本资源库专业委员会提出。本文件由中国研究型医院学会归口。本文件起草单位：天津医科大学肿瘤医院，天津医科大学肿瘤医院，上海芯超生物科技有限公司，复旦大学附属肿瘤医院，北京协和医院，中国科学技术大学附属第一医院，北京友谊医院。本文件主要起草人：李海欣，郭燕，张小燕，孙孟红，郭丹，叶庆，张允。石蜡样本制作微阵列组织芯片通用技术规范1范围本文件规定了石蜡样本制作微阵列组织芯片的总则、制作原理、试验方法和性能要求等内容。本文件适用于科研用石蜡样本制作微阵列组织芯片的通用技术规范。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不
3、注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB37864-2019生物样本库质量和能力通用要求GBfr27990-2011生物芯片基本术语3术语和定义以下术语和定义适用于本文件。3.1组织芯片技术tissuechiptechnology是将数十个至上千个不同个体的组织样本,按照预先设计的顺序排列在一张玻片上进行分析研究的方法。3.2微阵列microarray以阵列方式设定在平面基质载体上能够并行处理生物样品中多个信息的微处理单元的集合体。3.3微阵列组织芯片tissuemicroarray又称为组织芯片,在基片表面以微阵列形式将微小组织切片样本固定后所构成的微型器件。3.4
4、石蜡包埋araffin-embedding将组织样品置于石蜡中，产生固化的周围基质，制作成石蜡组织样本，用于切割出薄层显微切片的过程。3.5HE切片HEsection将石蜡包埋的组织制成蜡块后，用切片机制成病理组织切片，再经脱蜡、苏木素及伊红染色，脱水封片后制作而成的常规组织染色切片。3.6阵列规整度regularity微阵列上各点所在行列的对齐程度，规整度通常用样品点间中心距离的差异来衡量。3.7相关数据associateddata生物样本的附属信息，包括但不限于研究数据、表型数据、临床数据、流行病学数据和生物样本处理过程得到的数据等。3.8贮存storage在适宜的条件下长时间中断样品、分
5、析物或其衍生物（如染色切片或组织块）的分析前工作流程，以保持其特性。4总则本标准适用于科研用石蜡样本制作组织微阵列的通用技术规范。开展此项技术，应具备专用区域，技术人员需获得相关专业的人员培训证书，并严格遵循实验室操作规程，相关操作需符合实验室生物安全通用要求。5基本原理组织芯片是利用微点阵技术，将数十、数百乃至上千个特定大小的组织片有序排列在固相载体上，用于研究生物分子在机体内的表达。6试验方法6.1 材料6.1.1 主要设备：生物安全柜、光学显微镜、病理切片机、组织芯片仪等。6.1.2 试剂耗材：蜡块、载玻片、盖玻片、苏木伊红染色液等。6.2 方法6.2.1组织芯片蜡块的制作6.2,1.1
6、组织筛选与定位依据科研目的，收集病例及相关石蜡样本，制作HE切片，显微镜下复核诊断，选定目标区域后，添加标记。6.2.1.2受体蜡块的准备若自行制作，受体蜡块的软硬度应与供体蜡块相似，可利用组织芯片仪在受体蜡块上打孔。另外，亦可以使用商品化的受体蜡块用于后续制作。6.2.1.3组织芯的采集与转移将HE切片的标记区域一一对应地标记在供体蜡块的相应位置。然后采集它们的组织芯，整齐有序地转移至相应的受体蜡块之中。在此过程中，应选择性能稳定的手动或是半（全）自动组织芯片仪，用于组织芯的采集和转移，避免使用自制的简易设备用于组织芯片蜡块的制作。6.2.1.4受体蜡块与组织芯融合经烤箱加热后进一步微调受体
7、蜡块中组织芯的高度,并使之相互融合成一体，制成组织芯片蜡块。6.2.2组织芯片切片的制作6.2.2.1组织芯片蜡块放4C。冰箱预冷。6.2.2.2用切片机对组织芯片蜡块进行连续切片，制成厚度约为5m的病理组织切片，再将其转移至载玻片上，即可得到组织芯片切片。6.2.2.3组织芯片切片应进行烘干，一般为55C。环境下，时长不低于1小时。待晾至常温后，可以临时将其放置切片储存柜内备用。7信息存储M被检测样本的编号应具有唯一性。待样本依据科研方案排列整理后，应及时做好记录工作，确保样本的可追溯性，实验室内需要配备数据保存及保证数据安全的设施。7.2应确保微阵列组织芯片所涉及样本相关数据的保密性和安全
8、性，保证相关数据仅用于科学研究，保护捐献者的隐私和合法权益。8性能要求8.1 组织芯片蜡块8.1.1 所制备的组织芯片蜡块起始位点明确，其内的组织芯整体平整。8.1.2 每个组织芯较为完整，单个缺损面积介于目标位点10%以内。8.1.3 组织芯内无气泡，无裂痕，无移位、倒伏、变形。8.2 组织芯片切片8.2.1 所制备的组织芯片切片阵列规整度良好，经常规病理HE染色后，观察载玻片上的组织芯排列情况，是否存在移位、皱褶、脱失现象。8.2.2 光学显微镜下观察组织学结构的完整性，细胞占比。同时，与各组织芯原供体石蜡标本进行对比，观察病理诊断结果的一致性。8.2.3 依据科研目的观察免疫表型情况，组
9、织芯片经免疫组化染色后检测靶蛋白定位分布、染色强度、特异性，以及与常规石蜡切片行免疫组化染色的一致性。8.2.4 2.4在排除不可分析的组织芯后，计算出组织芯片的利用率，即可分析组织点数/总的组织点数。排除标准如下：8.2.4.1组织芯不含有目的组织。8.2.4.2组织芯残缺、掉片，剩余面积低于组织芯原有面积的60%。8.2.4.3组织芯所含待测样本的面积低于组织芯原有面积的20%o82.4.4组织芯折叠，影响观察或未折叠部分不符合以上第二、三项。8. 2.4.5移位严重，无法确定组织芯原始位置。8.3依据科研目的，凡对组织芯片切片质量要求较高者，可根据临床技术操作规范-病理学分册中的切片质量
10、基本标准要求的相关指标,进行量化打分,分辨切片的优质等级程度。9运输和贮存9.1 运输和贮存温度宜在常温条件下，进行样本运输和贮存。9.2 运输方式宜采用蜡块盒和切片盒进行包装，并经过填充后运输，保证其在运输过程中不受自然损坏。9.3 贮存方式宜在干燥环境中，采用蜡块柜和切片柜进行贮存，尚可放入4冷藏室内进行长期保存。储存过程中应注意防潮防霉，防尘防鼠，确保其在储存过程中不受自然损坏。参考文献1GB27990-2011,生物芯片基本术语.2YY/T0692-2008生物芯片基本术语。3GB19489-2008,实验室生物安全通用要求。4周小鸽,张劲松,张小平等.组织芯片,中华病理学杂志,200
11、2,31(1):70-72.5刘俊才，陈宣世，陈友霞等.二次包埋法手工制作病理学教学组织芯片.解剖科学进展,201016(4):357-359.6ISBER最佳实践2018,中国医药生物技术,2018年第13卷增刊。7临床技术操作规范(病理学分册,ISBN7801941950)o|8丁会珍,刘丹丹,李亚卓等.诊断病理学杂志,2020,27(8):598-601.9JenaMGiltnane1,DavidLRimm.Technologyinsight:Identificationofbiomarkerswithtissuemicroarraytechnology.NatClinPract0ncol.2004Dec;1(2):104-11.
